NY/T 1158-2006
基本信息
标准号： NY/T 1158-2006
中文名称：动物性食品中甲硝唑残留的检测方法 高效液相色谱法
标准类别：农业行业标准(NY)
英文名称：Method for determination of metronidazole residues in animal derived food High performance liquid chromatography
标准状态：现行
发布日期：2006-07-10
实施日期：2006-10-01
下载格式：pdf zip
相关标签： 动物性 食品 残留 检测 方法 高效 液相 色谱法
标准分类号
标准ICS号： 食品技术>>67.050食品试验和分析的一般方法
中标分类号：食品>>食品综合>>X04基础标准与通用方法
关联标准
出版信息
出版社：中国农业出版社
页数：10页
标准价格：12.0
出版日期：2006-10-01
相关单位信息
起草人：王大菊、刘书庆、邱银生、艾霞
起草单位：华中农业大学、湖南省医药工业研究院有限公司
归口单位：中华人民共和国农业部
提出单位：中华人民共和国农业部
发布部门：中华人民共和国农业部
主管部门：中华人民共和国农业部
标准简介
本标准规定了动物性食品中甲硝唑残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。
本标准适用于猪和鸡肌肉、肝脏、肾脏、脂肪组织中甲硝唑残留量检测。
标准图片预览
标准内容
ICS67.050
中华人民共和国农业行业标准
NY/T1158—2006
动物性食品中甲硝唑残留的检测方法高效液相色谱法
Method for determination of metronidazole residues in animal derived foodHigh performance liquid chromatography2006-07-10发布
2006-10-01实施
中华人民共和国农业部
本标准附录A附录B为资料性附录。前言
本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：华中农业大学、湖北省医药工业研究院有限公司本标准主要起草人：王大菊、刘书庆、邱银生、艾霞。NY/T1158—2006
1范围
动物性食品中甲硝唑残留的检测方法高效液相色谱法
NY/T1158—2006
本标准规定了动物性食品中甲硝唑残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。本标准适用于猪和鸡肌肉、肝脏、肾脏、脂肪组织中甲硝唑残留量检测。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT6682一1992分析实验室用水规则和试验方法3制样
3.1样品的制备
取适量新鲜或冷冻的空白或供试组织，剪碎，10000r/min匀浆。3.2样品的保存
一20℃以下冰箱中贮存备用。
4测定方法
4.1方法提要或原理
试料中残留的甲硝唑经乙睛提取，SiO，固相柱净化，高效液相色谱一紫外检测法测定，外标法定量。
4.2试剂和材料
以下所用试剂，除特别注明外，均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682一1992规定的二级水。4.2.1甲硝唑对照品含甲硝唑（C.HgNO）不得少于99.0%4.2.2乙睛色谱纯
4.2.3甲醇色谱纯
4.2.4乙酸乙酯色谱纯或重蒸馏
4.2.5正已烷
4.2.6二乙胺
4.2.7磷酸
4.2.8无水硫酸钠
4.2.9磷酸溶液
取85%磷酸（HPO04)1.2mL，加水稀释，用二乙胺约1.5mL,调pH至3.0~3.2用水定容至1000mL
乙酸乙酯-甲醇溶液（88+12
NY/T1158—2006
4.2.11正已烷-乙酸乙酯溶液（100+50）4.2.12
2甲硝唑标准储备液
准确称取甲硝唑对照品50mg，用甲醇溶解，并稀释成浓度为0.5mg/mL的标准储备液，-20冰箱中保存，有效期3个月。
4.2.13甲硝唑标准工作液
准确量取适量甲硝唑标准储备液，用流动相稀释成浓度分别为0.0125.0.025、0.05、0.1、1.010μg/mL的标准工作液，供高效液相色谱分析。4.3仪器和设备
4.3.1高效液相色谱仪（配紫外检测器）4.3.2固相萃取柱SiOz柱500mg/5ml4.3.3
微量进样器
分析天平感量0.00001g
天平感量0.01g
组织匀浆机
漩涡混合器
旋转蒸发仪
超声清洗机
离心机
电热恒温水浴锅
2鸡心瓶
具塞聚丙烯离心管
4.4测定步骤
4.4.1试料的制备
试料的制备包括：
取勾浆的供试样品，作为供试试料。取匀浆的空白样品，作为空白试料。一取匀浆的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加试料。4.4.2提取
称取肌肉和肾脏试料（5土0.1）g置50mL具塞聚丙烯离心管中，加乙20mL、正已烷10mL，游涡混合5min，静置，3000r/min离心10min，弃去正已烷层；取乙睛层加无水硫酸钠10g，充分震荡，静置，3000r/min高心10min，取上清液至鸡心瓶中，置40℃~45℃水浴中旋转蒸发至干，残余物用正己烷-乙酸乙酯溶液5mL溶解，用正已烷-乙酸乙酯溶液5mL分两次洗涤鸡心瓶，合并两次溶液，备用。称取脂肪试料（5g土0.1）g置50mL具塞聚丙烯离心管中，加乙睛20mL、正已烷10mL，漩涡混合5min，静置，30001/min离心10min，弃去正已烷层：取乙睛层加无水硫酸钠10g，充分震荡，静置，3000r/min离心10min，取上清液至鸡心瓶中，置40℃~45℃水浴中旋转蒸发至干，残余物用正已烷-乙酸乙酯溶液5mL溶解，合并两次溶液，40℃45℃水浴旋转氮气吹于。用流动相0.5mL溶解残余物，充分震荡后，供HPLC分析。
称取肝脏试料（10.0土0.1g）置于50ml聚内烯离心管中，加人乙酸乙酯20mL，漩涡混合5min，3000r/min离心10min，取上清液于旋转蒸发瓶中。加无水硫酸钠10g，充分震荡，静置，3000r/min离心10min，取上清液至鸡心瓶中，置40℃~45℃水浴中旋转蒸发至干，残余物用正已烷-乙酸乙酯溶液5mL溶解，用正已烷一乙酸乙醋溶液5mL洗涤鸡心瓶，合并两次溶液，备用。2
4.4.3净化
NY/T1158—2006
将SiQ固相柱依次用甲醇5mL、乙酸乙酯-甲醇溶液15mL，乙酸乙酯溶液10mL和正已烧-乙酸乙酯溶液10mL预洗，真空抽干。取备用液过SiO,柱，自然流出，弃去流出液，抽于。用正已烷-乙酸乙脂溶液4mL洗柱，真空抽干。再用乙酸乙酯-甲醇溶液6mL洗脱，收集洗脱液至10mL离心管中，于40C45C水浴氮气吹干，加流动相0.2mL溶解残余物，供HPLC分析。4.4.4测定
4.4.4.1色谱条件
色谱柱：Hypersil-Cjs250mm×4.6mm（i.d)，粒径5μm或10μm。流动相：pH3.2磷酸溶液-乙腈-甲醇（850+112+38）或pH3.0（920+50+30）。检测波长：325nm。
柱温：室温。
流速：0.9或0.8mL/min。
进样量：20L。
4.4.4.2液相色谱测定
根据试样溶液中甲硝唑的含量，选择响应值相近的标准工作液，等体积参插测定，以色谱峰面积积分值定量。标准工作液及试样溶液中甲硝唑的响应值均应在仪器测定的线性范围之内。在上述色谱条件下，甲硝唑色谱峰参考保留时间分别为7.8min和9.5min.标准溶液和试样溶液的液相色谱图见附录A。
4.4.5空白试验
除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。4.5结果计算与表述
按式(1)计算试样中甲硝唑的残留量（ug/kg）：Cs\A-V
式中：
-试料中甲硝唑的残留量（pg/kg）；X
标准工作液中甲硝唑的浓度（pg/mL）；A试样溶液中甲硝唑的峰面积；
一浓缩至干后，溶解残余物所用流动相的总体积（mL）As—标准工作液中甲硝唑的峰面积；M一组织样品的质量（g）。
注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后2位。5检测方法灵敏度、准确度、精密度5.1灵敏度
本方法在猪和鸡的肌肉、肝脏、肾脏、脂肪组织中的检测限为1哆/kg。5.2准确度
本方法在1μg/kg2μg/kg和4μg/kg添加浓度的回收率为50%~70%。5.3精密度
本方法的批内和批间变异系数均为CV<20%。6本方法中在猪和鸡可食组织中添加浓度及其回收率参见附录B(1)
NY/T1158—2006
甲硝唑高效液相色谱图
附录A
（资料性附录）
甲硝唑高效液相色谱图
Minutes
Minutes
甲硝唑标准溶液色谱图（0.03μg/mL）0.0003
图A.1.2鸡肌肉组织中甲硝唑色谱图(1μg/kg)
Minutes
图A.1.3鸡肝脏组织中甲硝唑色谱图(2μg/kg）
Minutes
鸡肾脏组织中甲硝唑色谱图
（1μg/kg）
Minutes
图A.1.6猪肌肉组织中甲硝唑色谱图(1μg/kg）
Minutes
图A.1.8猪肾脏组织中甲硝唑色谱图(2μg/kg）
NY/T1158—2006
Minutes
鸡脂肪组织中甲硝唑色谱图
(2μg/kg）
Minutes
猪肝脏组织中甲硝唑色谱图
(2μg/kg）
Minutes
猪脂肪组织中甲硝唑色谱图
(2μg/kg）
NY/T1158—2006
图A，2室内复核甲硝唑色谱图
TTTTTETTTE
2.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.00Minutes
标准溶液色谱图（0.05μg/mL）CLS
Minutes
猪空白肌肉组织中甲硝唑色谱图（1μg/kg）5.00
Minutes
猪的空白脂肪组织中甲硝唑色谱图（2ug/kg）图A.2.3
Minutes
猪的空自肾脏组织中甲硝唑色谱图(2/kg）图A.2.4
Minutes
猪的空白肝脏组织中甲硝唑色谱图（1μug/kg）NY/T1158—2006
NY/T1158—2006
复核试验
附录B
(资料性附录）
猪鸡组织样品中甲硝唑的回收率（%）药物浓度（μg/kg）
64.6±2.2
61.3±5.9
57.1±3.3
60.1±3.5
61.5±3.3
59.3±1.8
54.4±4.6
59.5±3.9
68.6±2.7
60.9±4.3
55.3±2.4
57.8±3.3
54.4±4.2
58.3±2.1
55.8±2.1
60.0±3.6
复核试验猪组织样品中甲硝唑的回收率（%）药物浓度（pg/kg）
66.4±11.0
59.3±5.5
63.2±5.4
65.9±8.3
84.5±22.5vv99.net
69.2±11.0
61.8±4.9
64.2±4.8
67.5±5.8
69.9±18.2
69.3±1.9
58.6±2.7
55.9±3.3
53.4±2.5
55.7±1.9
55.8±2.4
57.5±1.1
60.3±2.4
70.6±10.6
63.6±4.7
66.2±3.7
69.0±7.0
71.4±10.7
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中华人民共和国农业行业标准
NY/T1158—2006
动物性食品中甲硝唑残留的检测方法高效液相色谱法
Method for determination of metronidazole residues in animal derived foodHigh performance liquid chromatography2006-07-10发布
2006-10-01实施
中华人民共和国农业部
本标准附录A附录B为资料性附录。前言
本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：华中农业大学、湖北省医药工业研究院有限公司本标准主要起草人：王大菊、刘书庆、邱银生、艾霞。NY/T1158—2006
1范围
动物性食品中甲硝唑残留的检测方法高效液相色谱法
NY/T1158—2006
本标准规定了动物性食品中甲硝唑残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。本标准适用于猪和鸡肌肉、肝脏、肾脏、脂肪组织中甲硝唑残留量检测。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT6682一1992分析实验室用水规则和试验方法3制样
3.1样品的制备
取适量新鲜或冷冻的空白或供试组织，剪碎，10000r/min匀浆。3.2样品的保存
一20℃以下冰箱中贮存备用。
4测定方法
4.1方法提要或原理
试料中残留的甲硝唑经乙睛提取，SiO，固相柱净化，高效液相色谱一紫外检测法测定，外标法定量。
4.2试剂和材料
以下所用试剂，除特别注明外，均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682一1992规定的二级水。4.2.1甲硝唑对照品含甲硝唑（C.HgNO）不得少于99.0%4.2.2乙睛色谱纯
4.2.3甲醇色谱纯
4.2.4乙酸乙酯色谱纯或重蒸馏
4.2.5正已烷
4.2.6二乙胺
4.2.7磷酸
4.2.8无水硫酸钠
4.2.9磷酸溶液
取85%磷酸（HPO04)1.2mL，加水稀释，用二乙胺约1.5mL,调pH至3.0~3.2用水定容至1000mL
乙酸乙酯-甲醇溶液（88+12
NY/T1158—2006
4.2.11正已烷-乙酸乙酯溶液（100+50）4.2.12
2甲硝唑标准储备液
准确称取甲硝唑对照品50mg，用甲醇溶解，并稀释成浓度为0.5mg/mL的标准储备液，-20冰箱中保存，有效期3个月。
4.2.13甲硝唑标准工作液
准确量取适量甲硝唑标准储备液，用流动相稀释成浓度分别为0.0125.0.025、0.05、0.1、1.010μg/mL的标准工作液，供高效液相色谱分析。4.3仪器和设备
4.3.1高效液相色谱仪（配紫外检测器）4.3.2固相萃取柱SiOz柱500mg/5ml4.3.3
微量进样器
分析天平感量0.00001g
天平感量0.01g
组织匀浆机
漩涡混合器
旋转蒸发仪
超声清洗机
离心机
电热恒温水浴锅
2鸡心瓶
具塞聚丙烯离心管
4.4测定步骤
4.4.1试料的制备
试料的制备包括：
取勾浆的供试样品，作为供试试料。取匀浆的空白样品，作为空白试料。一取匀浆的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加试料。4.4.2提取
称取肌肉和肾脏试料（5土0.1）g置50mL具塞聚丙烯离心管中，加乙20mL、正已烷10mL，游涡混合5min，静置，3000r/min离心10min，弃去正已烷层；取乙睛层加无水硫酸钠10g，充分震荡，静置，3000r/min高心10min，取上清液至鸡心瓶中，置40℃~45℃水浴中旋转蒸发至干，残余物用正己烷-乙酸乙酯溶液5mL溶解，用正已烷-乙酸乙酯溶液5mL分两次洗涤鸡心瓶，合并两次溶液，备用。称取脂肪试料（5g土0.1）g置50mL具塞聚丙烯离心管中，加乙睛20mL、正已烷10mL，漩涡混合5min，静置，30001/min离心10min，弃去正已烷层：取乙睛层加无水硫酸钠10g，充分震荡，静置，3000r/min离心10min，取上清液至鸡心瓶中，置40℃~45℃水浴中旋转蒸发至干，残余物用正已烷-乙酸乙酯溶液5mL溶解，合并两次溶液，40℃45℃水浴旋转氮气吹于。用流动相0.5mL溶解残余物，充分震荡后，供HPLC分析。
称取肝脏试料（10.0土0.1g）置于50ml聚内烯离心管中，加人乙酸乙酯20mL，漩涡混合5min，3000r/min离心10min，取上清液于旋转蒸发瓶中。加无水硫酸钠10g，充分震荡，静置，3000r/min离心10min，取上清液至鸡心瓶中，置40℃~45℃水浴中旋转蒸发至干，残余物用正已烷-乙酸乙酯溶液5mL溶解，用正已烷一乙酸乙醋溶液5mL洗涤鸡心瓶，合并两次溶液，备用。2
4.4.3净化
NY/T1158—2006
将SiQ固相柱依次用甲醇5mL、乙酸乙酯-甲醇溶液15mL，乙酸乙酯溶液10mL和正已烧-乙酸乙酯溶液10mL预洗，真空抽干。取备用液过SiO,柱，自然流出，弃去流出液，抽于。用正已烷-乙酸乙脂溶液4mL洗柱，真空抽干。再用乙酸乙酯-甲醇溶液6mL洗脱，收集洗脱液至10mL离心管中，于40C45C水浴氮气吹干，加流动相0.2mL溶解残余物，供HPLC分析。4.4.4测定
4.4.4.1色谱条件
色谱柱：Hypersil-Cjs250mm×4.6mm（i.d)，粒径5μm或10μm。流动相：pH3.2磷酸溶液-乙腈-甲醇（850+112+38）或pH3.0（920+50+30）。检测波长：325nm。
柱温：室温。
流速：0.9或0.8mL/min。
进样量：20L。
4.4.4.2液相色谱测定
根据试样溶液中甲硝唑的含量，选择响应值相近的标准工作液，等体积参插测定，以色谱峰面积积分值定量。标准工作液及试样溶液中甲硝唑的响应值均应在仪器测定的线性范围之内。在上述色谱条件下，甲硝唑色谱峰参考保留时间分别为7.8min和9.5min.标准溶液和试样溶液的液相色谱图见附录A。
4.4.5空白试验
除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。4.5结果计算与表述
按式(1)计算试样中甲硝唑的残留量（ug/kg）：Cs\A-V
式中：
-试料中甲硝唑的残留量（pg/kg）；X
标准工作液中甲硝唑的浓度（pg/mL）；A试样溶液中甲硝唑的峰面积；
一浓缩至干后，溶解残余物所用流动相的总体积（mL）As—标准工作液中甲硝唑的峰面积；M一组织样品的质量（g）。
注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后2位。5检测方法灵敏度、准确度、精密度5.1灵敏度
本方法在猪和鸡的肌肉、肝脏、肾脏、脂肪组织中的检测限为1哆/kg。5.2准确度
本方法在1μg/kg2μg/kg和4μg/kg添加浓度的回收率为50%~70%。5.3精密度
本方法的批内和批间变异系数均为CV<20%。6本方法中在猪和鸡可食组织中添加浓度及其回收率参见附录B(1)
NY/T1158—2006
甲硝唑高效液相色谱图
附录A
（资料性附录）
甲硝唑高效液相色谱图
Minutes
Minutes
甲硝唑标准溶液色谱图（0.03μg/mL）0.0003
图A.1.2鸡肌肉组织中甲硝唑色谱图(1μg/kg)
Minutes
图A.1.3鸡肝脏组织中甲硝唑色谱图(2μg/kg）
Minutes
鸡肾脏组织中甲硝唑色谱图
（1μg/kg）
Minutes
图A.1.6猪肌肉组织中甲硝唑色谱图(1μg/kg）
Minutes
图A.1.8猪肾脏组织中甲硝唑色谱图(2μg/kg）
NY/T1158—2006
Minutes
鸡脂肪组织中甲硝唑色谱图
(2μg/kg）
Minutes
猪肝脏组织中甲硝唑色谱图
(2μg/kg）
Minutes
猪脂肪组织中甲硝唑色谱图
(2μg/kg）
NY/T1158—2006
图A，2室内复核甲硝唑色谱图
TTTTTETTTE
2.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.00Minutes
标准溶液色谱图（0.05μg/mL）CLS
Minutes
猪空白肌肉组织中甲硝唑色谱图（1μg/kg）5.00
Minutes
猪的空白脂肪组织中甲硝唑色谱图（2ug/kg）图A.2.3
Minutes
猪的空自肾脏组织中甲硝唑色谱图(2/kg）图A.2.4
Minutes
猪的空白肝脏组织中甲硝唑色谱图（1μug/kg）NY/T1158—2006
NY/T1158—2006
复核试验
附录B
(资料性附录）
猪鸡组织样品中甲硝唑的回收率（%）药物浓度（μg/kg）
64.6±2.2
61.3±5.9
57.1±3.3
60.1±3.5
61.5±3.3
59.3±1.8
54.4±4.6
59.5±3.9
68.6±2.7
60.9±4.3
55.3±2.4
57.8±3.3
54.4±4.2
58.3±2.1
55.8±2.1
60.0±3.6
复核试验猪组织样品中甲硝唑的回收率（%）药物浓度（pg/kg）
66.4±11.0
59.3±5.5
63.2±5.4
65.9±8.3
84.5±22.5vv99.net
69.2±11.0
61.8±4.9
64.2±4.8
67.5±5.8
69.9±18.2
69.3±1.9
58.6±2.7
55.9±3.3
53.4±2.5
55.7±1.9
55.8±2.4
57.5±1.1
60.3±2.4
70.6±10.6
63.6±4.7
66.2±3.7
69.0±7.0
71.4±10.7
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