WS/T 40-1996
基本信息
标准号： WS/T 40-1996
中文名称：尿中2-硫代噻唑烷-4-羧酸的高效液相色谱测定方法
标准类别：卫生行业标准(WS)
英文名称：Urine—Determination of 2-thiothiazolidine-4-carboxylicacid—High performance liquid chromatographic method
标准状态：现行
发布日期：1996-10-14
实施日期：1997-05-01
下载格式：pdf zip
标准分类号
中标分类号：医药、卫生、劳动保护>>医药、卫生、劳动保护综合>>C04基础标准与通用方法
关联标准
出版信息
出版社：中国标准出版社
书号：155066.2-11557
页数：6页
标准价格：14.0
出版日期：2005-01-03
相关单位信息
起草人：李晓立、沈惠麒
起草单位：中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所
归口单位：中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所
提出单位：卫生部卫生监督司
发布部门：中华人民共和国卫生部
标准简介
本标准规定了尿中2-硫代噻唑烷-4-羧酸的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于接触二硫化碳工人尿中TTCA的测定。
标准图片预览
标准内容
中华人民共和国卫生行业标准
尿中2-硫代噻唑烷-4-羧酸的
高效液相色谱测定方法
Urinc-Determination of 2-thiothiazolidine-4-carboxylic acidHigh performance liquidchromatographic method
1生题内容与适用范围
本标推规定了尿中2-硫代噻唑烷-4-羧酸的高效液相色谱测定方法。本法最低检测浓度为8 g/L。
本标推适用丁接触二硫化碳T人尿中TTCA的测定。2原理
WS/T 40-1996
尿样经盐酸酸化后，TTCA被乙醚萃取、经高效液相色谱反相Cs柱分离，紫外检测器273nm检测。保留时间定性，峰高定性，3仪器
3.1高效液相色谱仪，紫外检测器。3.2电热恒温水浴。
3.3液休快速混句器
3.4微量注射器，20L，
3.5移液管,Iml..5mL
3.6容量瓶,100ml..
3.7具赛试管，10mL。
3.8聚乙烯塑料瓶，100ml.。
3.9尿比重计。
4试剂
本法所用试剂除另有说明外，均为分析纯试剂：4.1实验用水，去离子水经全玻璃蒸馏重蒸馏后，加盖保存。4.2 盐酸,pu1. 19 g/ml.,
4. 3冰Z酸-P2,=1. 05 g/ml.。
4.4甲醇，优级纯或经重蒸馏的分析纯试剂。4.5乙醚，使用新的试剂，否则临用前须经中性氧化铝柱除去过氧化物。4.6盐酸溶液.2 mcl/L，
4.7TTCA（2-硫代噻唑烷-4-羧酸）：制备方法见附录A。中华人民共和国卫生部1996-10-14批准1997-05-01实施
WS/T 40-1996
4.8TTCA标准溶液：准确称取40.0mgTTCA（4.7)，于100mL容最瓶中，用水稀释至刻度。此溶液1mL=400TTCA。再将其用水稀释10倍，浓度为1mL=40TTCA。置4C冰箱可保存两周。4.9质控样；用加标的模拟尿、接触者混台尿或加标的正常人混合尿作质控样，5采样、运输和保存
用聚乙烯塑料瓶采集约50ml班未尿，尽快测定比重后，于常温下运输，但夏季运输需要冷藏，于一8℃下可保存一周。
6分析步骤
6.1仪器操作条件
6.1.1色谱柱：反相Cls键合硅胶柱。6.1.2流动相：甲醇+水+冰乙酸=14.5+84.5+1；流速：1.5mL/min
6.1.3紫外检测波长：273nm。
6.2空白试验wwW.vv99.Net
用正常人混合碌样按6.3条处理、6.5条测定。6.3样品处理
取1mL经离心后的尿样臀于具塞试管中.0.1mL盐酸溶液（4.6)及5ml.乙，于液体快速混勺器上振摇2min。下30)r/min离心10nin后，将乙醚溶液全量转移至另一试管中，置40C水浴上吹氮至下，加入200ul.甲醇溶解残渣。6.4标准曲线的绘制
取5支具塞试管，按下表配制标准管。TICA 标准誉的配制，
TTCA标准溶液（4.8),ml
水，mL
TTCA含量+HR
取上述标准管中溶液各20uL.进HPLC测定。以TTCA含量（μg）为横坐标，色谱蜂高为纵坐标，绘制标准曲线。
6.5样品测定
取经6.3条处理的样品液20uI.进FIP1.C进行测定。同时测定空凸样（6.2），其色谱图见下图。在测定前后及每测定10个样品后，测定一次质控样。7计算
WS/T 40.-.-1996
0510tmin
TTCA接触者尿样色谱图
7.1按式(1)计算尿样换算成标准比重(1.020)下浓度的校正系数。1.020 1. 000
实测比重 — 1. 000
7.2按式(2)计算尿中TTCA的浓度、X=10×c·k
式中：X—尿中TTCA浓度.mg/LI
-从标准曲线查得的TTCA浓度，g/20uL。8说明
8.1本法检测限0.Rng+取尿样1mL时.最低检测浓度为8g/L。线性范围：0~8mg/1。精密度CV=0.52%~3.3%（TTCA含量0~0.8，n=12)。准确度：现场样品加标回收率=78.0%~91.0%(TrCA本底浓度为1. 73~2.84mg/L.加标浓度为2~16mg/Ln=2)。8.2对接触者应取班末尿分析。取样前工人须脱离工作场所，洗净手，以防样品污染。8.3影响测定的因素
8.3.1本法将离心的尿样经乙醚提取后再次离心，使乙醛层便于分离，转移，从而保证了分析的准确度。
8.3.2本法将国外文献的梯度洗脱条件改为等度洗脱，在色谱仪只有一个泵的情况下亦可使用，便于在国内推广。亦可采用两种流动相切换洗脱（A液，甲醇+冰乙酸+水=0.5+95+4.5；的液：甲醇冰乙酸+水=95+0.5+4.5），洗脱顺序：0~3.5minA洗脱3.5~6.5min，B洗脱；6.5~10minA洗脱。切换洗脱可使录中杂质较快流出，同时亦适于单泵操作。8.3.3色谱柱亦可采用径向加压柱Radial-PAKC，分离效果良好。8.4质控样用加标的模拟尿和加标的正常人混合尿时，可考察测定的准确度及精密度。用接触者混合尿时则只能考察精密度。但人尿样品不能久存。模拟尿则只含人尿的大量成分。WS/T 40—:1996
附录A
TTCA标准品的制备
（补充件）
用 1.-胱氢酸在碳酸钾存在下与二硫化碳反应24 1。酸化后用稀硝酸和三氟甲烷-丙酮两次重结晶得纯品。
SCH-CH--COOH
S--H. CH--OOH
CHCOOK
+ HOOC--CH--CH,--SS-
CH2- CH---COOH
合成方法:碳酸钾 1. 12 g(8 m moi)溶解在 G ml.水中,加入 L-胱氮酸 0. 96 g(4 m mol)温热至全溶。冷却至室温后加一硫化碳1.2 ml.(16 m mal),温(22~～25C）,强烈揽拌24 h,用硅胶G薄层控制反应终点,反应完全后用盐酸酸化至pH=1。反应物以100 ml.乙醚分三次提取，含并乙醚提取液以3mI.1U%盐酸洗涤，分出乙醛层用无水硫酸镁T燥。下燥后的乙醚提取液在40℃左右回收乙醛，真空下蒸下,得到谈黄色 TTCA 松散的粉末 0.74 g粗品。此粗品用 6 mL1+1 稀盐酸加热溶解,少许活性磁脱色.趁热过滤，滤液冷却析出无色针状结晶（.5g（熔点180181）。收率76.6%。附加说明：
本标滩出卫生都节牛督南提出，本标准由中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所负责起草。本标准主要起草人李晓立、沈惠麒。本标准卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所负责解释。
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尿中2-硫代噻唑烷-4-羧酸的
高效液相色谱测定方法
Urinc-Determination of 2-thiothiazolidine-4-carboxylic acidHigh performance liquidchromatographic method
1生题内容与适用范围
本标推规定了尿中2-硫代噻唑烷-4-羧酸的高效液相色谱测定方法。本法最低检测浓度为8 g/L。
本标推适用丁接触二硫化碳T人尿中TTCA的测定。2原理
WS/T 40-1996
尿样经盐酸酸化后，TTCA被乙醚萃取、经高效液相色谱反相Cs柱分离，紫外检测器273nm检测。保留时间定性，峰高定性，3仪器
3.1高效液相色谱仪，紫外检测器。3.2电热恒温水浴。
3.3液休快速混句器
3.4微量注射器，20L，
3.5移液管,Iml..5mL
3.6容量瓶,100ml..
3.7具赛试管，10mL。
3.8聚乙烯塑料瓶，100ml.。
3.9尿比重计。
4试剂
本法所用试剂除另有说明外，均为分析纯试剂：4.1实验用水，去离子水经全玻璃蒸馏重蒸馏后，加盖保存。4.2 盐酸,pu1. 19 g/ml.,
4. 3冰Z酸-P2,=1. 05 g/ml.。
4.4甲醇，优级纯或经重蒸馏的分析纯试剂。4.5乙醚，使用新的试剂，否则临用前须经中性氧化铝柱除去过氧化物。4.6盐酸溶液.2 mcl/L，
4.7TTCA（2-硫代噻唑烷-4-羧酸）：制备方法见附录A。中华人民共和国卫生部1996-10-14批准1997-05-01实施
WS/T 40-1996
4.8TTCA标准溶液：准确称取40.0mgTTCA（4.7)，于100mL容最瓶中，用水稀释至刻度。此溶液1mL=400TTCA。再将其用水稀释10倍，浓度为1mL=40TTCA。置4C冰箱可保存两周。4.9质控样；用加标的模拟尿、接触者混台尿或加标的正常人混合尿作质控样，5采样、运输和保存
用聚乙烯塑料瓶采集约50ml班未尿，尽快测定比重后，于常温下运输，但夏季运输需要冷藏，于一8℃下可保存一周。
6分析步骤
6.1仪器操作条件
6.1.1色谱柱：反相Cls键合硅胶柱。6.1.2流动相：甲醇+水+冰乙酸=14.5+84.5+1；流速：1.5mL/min
6.1.3紫外检测波长：273nm。
6.2空白试验wwW.vv99.Net
用正常人混合碌样按6.3条处理、6.5条测定。6.3样品处理
取1mL经离心后的尿样臀于具塞试管中.0.1mL盐酸溶液（4.6)及5ml.乙，于液体快速混勺器上振摇2min。下30)r/min离心10nin后，将乙醚溶液全量转移至另一试管中，置40C水浴上吹氮至下，加入200ul.甲醇溶解残渣。6.4标准曲线的绘制
取5支具塞试管，按下表配制标准管。TICA 标准誉的配制，
TTCA标准溶液（4.8),ml
水，mL
TTCA含量+HR
取上述标准管中溶液各20uL.进HPLC测定。以TTCA含量（μg）为横坐标，色谱蜂高为纵坐标，绘制标准曲线。
6.5样品测定
取经6.3条处理的样品液20uI.进FIP1.C进行测定。同时测定空凸样（6.2），其色谱图见下图。在测定前后及每测定10个样品后，测定一次质控样。7计算
WS/T 40.-.-1996
0510tmin
TTCA接触者尿样色谱图
7.1按式(1)计算尿样换算成标准比重(1.020)下浓度的校正系数。1.020 1. 000
实测比重 — 1. 000
7.2按式(2)计算尿中TTCA的浓度、X=10×c·k
式中：X—尿中TTCA浓度.mg/LI
-从标准曲线查得的TTCA浓度，g/20uL。8说明
8.1本法检测限0.Rng+取尿样1mL时.最低检测浓度为8g/L。线性范围：0~8mg/1。精密度CV=0.52%~3.3%（TTCA含量0~0.8，n=12)。准确度：现场样品加标回收率=78.0%~91.0%(TrCA本底浓度为1. 73~2.84mg/L.加标浓度为2~16mg/Ln=2)。8.2对接触者应取班末尿分析。取样前工人须脱离工作场所，洗净手，以防样品污染。8.3影响测定的因素
8.3.1本法将离心的尿样经乙醚提取后再次离心，使乙醛层便于分离，转移，从而保证了分析的准确度。
8.3.2本法将国外文献的梯度洗脱条件改为等度洗脱，在色谱仪只有一个泵的情况下亦可使用，便于在国内推广。亦可采用两种流动相切换洗脱（A液，甲醇+冰乙酸+水=0.5+95+4.5；的液：甲醇冰乙酸+水=95+0.5+4.5），洗脱顺序：0~3.5minA洗脱3.5~6.5min，B洗脱；6.5~10minA洗脱。切换洗脱可使录中杂质较快流出，同时亦适于单泵操作。8.3.3色谱柱亦可采用径向加压柱Radial-PAKC，分离效果良好。8.4质控样用加标的模拟尿和加标的正常人混合尿时，可考察测定的准确度及精密度。用接触者混合尿时则只能考察精密度。但人尿样品不能久存。模拟尿则只含人尿的大量成分。WS/T 40—:1996
附录A
TTCA标准品的制备
（补充件）
用 1.-胱氢酸在碳酸钾存在下与二硫化碳反应24 1。酸化后用稀硝酸和三氟甲烷-丙酮两次重结晶得纯品。
SCH-CH--COOH
S--H. CH--OOH
CHCOOK
+ HOOC--CH--CH,--SS-
CH2- CH---COOH
合成方法:碳酸钾 1. 12 g(8 m moi)溶解在 G ml.水中,加入 L-胱氮酸 0. 96 g(4 m mol)温热至全溶。冷却至室温后加一硫化碳1.2 ml.(16 m mal),温(22~～25C）,强烈揽拌24 h,用硅胶G薄层控制反应终点,反应完全后用盐酸酸化至pH=1。反应物以100 ml.乙醚分三次提取，含并乙醚提取液以3mI.1U%盐酸洗涤，分出乙醛层用无水硫酸镁T燥。下燥后的乙醚提取液在40℃左右回收乙醛，真空下蒸下,得到谈黄色 TTCA 松散的粉末 0.74 g粗品。此粗品用 6 mL1+1 稀盐酸加热溶解,少许活性磁脱色.趁热过滤，滤液冷却析出无色针状结晶（.5g（熔点180181）。收率76.6%。附加说明：
本标滩出卫生都节牛督南提出，本标准由中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所负责起草。本标准主要起草人李晓立、沈惠麒。本标准卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所负责解释。
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