本标准规定了冻猪肉、冻鸡肉鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验方法。 本标准适用于冻猪肉、冻鸡肉鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验。其他类食品可参照使用。

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出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）的荧光抗体筛选检验方法
Fluorescent antibody screening method of Salmonellae(includingArizona)infoodforexport1992-12-28发布
中华人民共和国国家进出口商品检验局1993-05-01实施
中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品沙门氏菌属（包括亚利葵那菌）的荧光抗体筛选检验方法
Fluorescent antibody screening method of Salimonellae(including Arizona) in food for export1主题内容与适用范围
SN0171-92
代替ZBC53007—85
本标准规定了冻猪肉，冻鸡肉鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法。本标准适用于冻猪肉、冻鸡肉鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验。其他类食品可参照使用。
2引用标准
SN0170出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法3设备与材料
见SN0170，另附加以下特殊项目。3.1载玻片：76mm×26mm，厚度0.8~1.0mm，事先刻好编号及8个小方格，自左至右每行4格，上下共2行（或采用供免疫荧光技术专用的多凹涂膜载玻片），用洗涤剂彻底洗净油污，擦洗干净，并经滴水检查证实无油污后，再浸于95%乙醇中保存备用。3.2盖玻片：22mm×22mm，厚度0.13~0.17mm，按同上方法进行去除油污处理。3.3荧光显微镜：具有透射光或落射光光源装置，配装能透射波长为330～500nm的激发滤片与接收波长大于400nm的阻断滤片。
4溶液与试剂
4.10.01mol/LpH9.0磷酸盐-生理盐水缓冲溶液(PBS）溶解无水磷酸氢二钠1.42g，氯化钠8.5g于1000mL蒸馏水中，使完全溶解，用酸度计测定其pH值至9.0以上即可，必要时可用1mol/L氢氧化钠调整至pH9.1左右。4.2固定液
按顺序将无水乙醇60mL，三氯甲烷（CHCl.）30mL混勺，再加入36%~38%甲醛10mL，混匀即成。
注：此项固定液配制后可置4℃贮存，但重复使用次数以不超过3次为宜。4.3pH9.0碳酸盐-甘油缓冲溶液
溶解无水碳酸钠6g，无水碳酸氢钠37g于蒸馏水中，加至1000mL，使完全溶解，混勾，即成pH9.2碳酸盐缓冲液。
以上项缓冲液1份加甘油9份混匀即成。注：①所用甘油应选用优级纯品或分析纯品。中华人民共和国国家进出口商品检验局1992-12-28批准1993-05-01实施
SN0171-92
②配成后置4C贮存，在贮存期间其pH值逐渐下降，应以每2周左右重新配制一次为宜。4.4沙门氏菌多价荧光抗体试剂
选用经国家进出口商品检验局指定的以FITC标记的沙门氏菌A-67全价“OH”免疫球蛋白（或沙门氏菌A-60多价“OH\免疫球蛋白），染色时应按试剂所标明的带规染色工作浓度和稀释方法进行稀释后使用。
注：①所用荧光抗体试剂应在有效期限以内。②已稀释的荧光抗体试剂置4C贮存可使用1个月左右，保持其固有的染色亮度不变，如发现其染色亮度下降，则不能继续使用。
5试样制备
参照SN0170第2章进行。
6增菌培养
参照SN0170第2章进行。
7染色
7.1以直径3mm的接种环取已接种试样的最后增菌培养液1环，制成较薄的标本涂片，置37℃恒温箱（或室温）充分晾干后，用无水乙醇-三氯甲烷-甲醛固定液固定5～10min，再用95%乙醇浸洗后晾干（此项乙醇重复使用以不超过3次为宜）。7.2将沙门氏菌A-67多价\OH”免疫球蛋白试剂（或A-60多价\OH”免疫球蛋白试剂）按染色工作浓度滴加于各标本涂片上，放湿盒内，置37℃经30min后取出，用0.01mol/LpH9.0PBS冲去多余的荧光抗体，另换相同PBS浸洗10min，再以蒸馏水冲洗后晾干。7.3滴加pH9.0碳酸盐-甘油缓冲溶液后，加盖玻片封片。注：①对所用荧光抗体之染色工作浓度，必要时可用已知标准菌种重新测定。②每次涂片检查时皆应挑用1至数个已知染色阳性菌种作为对照实验。8镜检及报告结果
8.1镜检
先用低倍物镜扫视整个标本，再换较高倍物镜进行观察，并记录染色亮度与菌量等情况。菌体荧光染色亮度评定标准如下。4+：黄绿色闪亮荧光，菌体周围及中心轮廓清晰。3十：黄绿色明亮荧光，菌体周围及中心轮廓清晰。2十：黄绿色荧光较弱，菌体周围及中心轮廓清晰。1十：仅有暗淡的荧光，菌形尚可见。一：无荧光或菌形不清。
8.2结果判定
应结合发荧光菌体的形态、荧光亮度与菌量综合判定。8.2.1阳性及可疑阳性结果：菌体之荧光亮度达到2+左右，菌体形态特征基本符合沙门氏菌，且多数视野中均能检出数个菌体以上。8.2.2阴性结果：荧光亮度在2十以下，且不属于可疑阳性范围者，均为阴性。8.3报告方法
8.3.1荧光染色镜检为阴性结果：报告为“未检出沙门氏菌”或“未检出亚利桑那菌”或“未检出沙门氏菌和亚利桑那菌”。
SN 017192
8.3.2荧光染色镜检为阳性或可疑阳性结果：按SN0170第3章继续进行培养法检查，并根据培养法检查结果作报告。
前增菌法
SN 0171-92
附录A
出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）荧光抗体筛选检验方法示意图
（参考件）
25g样品加25mL
BP，打碎
20mLBP
10mL转种100ml
TTB或SC
直接增菌法
25g样品加25mL
SC，打碎
200mLSC
干蛋品
前增菌法
25名样品
加225mL
BP.摇匀
蛋品类
10mL转种100ml
TTB或SC
涂片、周定
阳性及可疑阳性
纯分离培养
生化学试验
血清学试验
报告结果
冰蛋品
直接增菌法
25g样品
加225mL
TTB或SC，摇匀
注：①以上各项增菌培养温度时间和分离方法，生化学及血清学试验，均参照SN0170进行②对可凝阳性结果可根据需要用原增菌培养液重新涂片、染色、镜检复查一次，SN 017192
附录B
直接法免疫荧光染色步骤示意图（参考件）
标本（增菌液）涂片（用直径3mm接种环）K氏固定减固定（5~10min）
95%乙醇（浸洗）。
加荧光抗体（适宜工作浓度）
（放援盒内37℃30min）
0.01mol/LpH9.0PBS（冲洗）
换同上PBS（洗10min或报满）
蒸馏水（种洗）
加pH9.0碳酸盐一甘油缓冲溶液封片暂按每浸洗3次左右换乙醇溶液1次。附加说明：
本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。本标准由中华人民共和国天津进出口商品检验局起草。本标准主要起草人何镜承、戚玉凤、张风才。（京）新登字023号
中华人民共和国进出口商品检验行业标准
出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）的荧光抗体筛选检验方法
SN 0171—92
中国标准出版社出版
(北京复外三里河）
中国标准出版社北京印刷广印刷版权专有不得翻印
开本880×12301/16印张1/2字数10于字1993年7月第一版1993年7月第一次印刷印数1-3000
书号：155066·2-8816
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