本标准规定了牛Q热微量补体结合试验的操作技术要求。本标准适用于牛、羊Q热微量补体结合试验抗体的检测，其他哺乳动物可能照本标准。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1087---2002
牛○热微量补体结合试验操作规程Procedure of micro-complement fixation testfor bovineQfever
2002-03-15发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2002-09-01实施
SN/T1087-2002
本标准按照GB/T1.1一1993标准化工作导则第1单元，标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》的要求，对原《中华人民共和国进出境动物检疫规程手册》（1997年12月）中的“牛Q热微量补体结合试验”进行修订。本标准的附录A是标准的附录。
本标准由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国关津出人境检验检疫局、广州出人境检验检疫局。本标准主要起草人：柯忠哲、朱世强、林志雄、张立怀、范华炜。本标准系首次发表的检验检疫行业标准。1范的
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准牛Q热微量补体结合试验操作规程Procedureofmicro-complementfixationtestfor bovine Q fever
本标准规定了牛Q热微量补体结合试验的操作技术要求。SN/T1087—2002
本标准适用于牛、羊Q热微量补体结合试验抗体的检测，其他哺乳动物可以参照本标准。2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T6682--1992分析实验室用水规格和试验方法3器材及试剂
3.1器材
3.1.1微量板：U型底96孔板。
3.1.2加样器：8道5μL～50μL可调式移液器，10pL～750μL可调式移液器。3.1.3各种规格塑料滴头、刻度玻璃吸管、试管、试管架。3.1.4离心机：低速，使用水平转子。3.1.5水浴锅：可调节温度。
3.2试剂
3.2.1抗原：按说明保存和使用。3.2.2标准抗原：按说明保存和使用。3.2.3标准阳性血清：按说明保存和使用。3.2.4
标准阴性血清：按说明保存和使用。被检血清：从被检动物静脉采血，分离血清，4C保存。3.2.6补体，按说明保存和使用。3.2.7溶血素：按说明保存和使用。3.2.8试验用蒸馏水为GB/T6682中的三级水。4预备试验
4.12%绵羊红细胞悬液：采成年绵羊血，一份血加1.2倍量的阿氏液，混匀，4℃保存，5d后备用。使用前摇匀，取出10mL，用离心机以2000r/min离心5min，弃去上清液，将下沉的红细胞泥用20倍量巴比妥绥冲液（VBD)洗涤，以2000r/min离心5min，重复洗涤三次，最后一次离心10min。取下沉的红细胞泥用VBD配制成2%(V/V)悬液。4.2溶血索效价的测定
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002-03-15批准2002-09-01实施
SN/T1087-2002
溶血素的稀释取溶血素0.1mL加VBD9.9mL混勾(如果是等量甘油保存的溶液，取济血素4.2.1
0.2mL加VBD9.8mL），制成100倍稀释的溶血素，再按表1稀释成不同倍数。表1
试管号
1:100溶血素/mL
VBD/mL
总量/mL
溶血素的稀释表
补体的稀释：按表2对补体做不同倍数的稀释。表2
试管号
稀释倍
补体/mL
VBD/mL
总量/mL
补体的稀释表
致敏红细胞悬液的制备：将不同稀释度（1：5001：6000)的溶血素与等量的2%红细胞液混合，置37℃水浴15min，为致敏红细胞。4.2.4溶血素效价的滴定：采用方阵法在微量板上滴定。如表3所示，1～9列为溶血素稀释度（1：500~1：6000)，A～H行为补体稀释度(1：30～1：100)。吸取不同稀释度的致敏红细胞悬液50μL，分别滴加于1～9列的各孔中。吸取不同稀释度的补体50μL，分别滴于A～H行各孔中，每孔再加25μLVBD，滴加完毕后，置微量振荡器上混匀，随后置37C温箱中感作30min后进行初判，置室温2h、水平转子离心机2000r/min离心5min或置4C冰箱中过夜后进行终判。4.2.5
溶血素效价的判读：对比标准溶血孔（见附录A)进行，在最小量的补体存在下，能使90%红细胞发生溶血的最高稀释倍数为一个单位溶血素，测定补体效价和做本试验时用两个单位溶血素。如表3的测定结果为，补体在1：70稀释时，发生90%溶血的最少溶血素为1：4000，该1：4000为一个单位溶血素。两个单位溶血素为1：2000。表3
1 : 90
1:1000
溶血素效价滴定判定举例表
1*2000
注：+为50%落血+为75%溶血：为100%溶血2
112500
1:3000
14000|1: 500016000
补休效价的测定：
SN/T1087—2002
按照表2配制1：30～1：100的补体；4.3.2
使用两个单位溶血素，制备致敏红细胞悬液；4.3.3按照表4在微量板上滴定补体效价。1～8列为1：301：100稀释的补体，各稀释度按表中定景添加，再以VBD补充至每孔50μL；每孔滴加25μL的抗原后，再滴加50μL2%致敏红细胞悬液，充分振荡混匀后，置37C温箱中感作30min后进行初判，然后置室温2h、水平转子离心机2000r/min离心5min或置4C冰箱中过夜后进行终判。4.3.4补体效价的判读：对比标准溶血孔（见附录A）进行取30=L补体呈现90%溶血，20ul补休空现75%～90%溶血时补体的最高稀释度作为补体的效价。在正式试验时补体用量为25μL，如表5的测定结果，1：70的补体25μL为一个单位补体，试验时用两个单位补体，则1：35补体25μL为两个单位补体。表4补体效价滴定
补体稀释度
补体稀释度
1 + 30
补体效价判定举例表
1 : 80
注：册为0%溶血，用为25%溶血，H为50%溶血，1为75%将血；一为100%落血。4.4
抗原效价的确认或测定：根据供应单位的抗原说明书来决定是否备要进行抗原效价的测定。如不需测定，则在确认抗原效价后按说明稀释使用；如需测定，则按下列步骤进行。4.4.1用VBD将抗原依次作1：50、1：100、1：200、1：400稀释2用VBD将阳性血清依次作1：20、1：40、1：80稀释。4.4.2
标准阴性血清不作稀释。
按表6建立试验。
SN/T1087—2002
4.4.5按原效价的判读：对比标准溶血孔（见附录A)进行，当血清对照孔、抗原对照孔、补体对照孔出现100%溶血，而红细胞对照孔不出现溶血且红细胞全部沉于孔底时判定抗原效价。以与阳性血清各稀释度发生完全抑制溶血的最高稀释度为一个单位抗原，正式试验使用2单位抗原，如表7所示，抗原效价为1：200，正式试验时用2单位抗原，即将抗原作1：100稀释。表6抗原测定表
抗原稀释度
抗原/μL
1 t10/pL
1:20/μL
1:40/μL
1:80/μL
1:10阴性血清/μL
2单位补体/μL
VBD/μL
致数红细胞/uL
4C感作12h~18h后再置室温10min50
红细胞
37C感作30min后进行初判，然后置室温2h、水平转子离心机2000r/min离心5min或置4C冰箱中过夜后进行终判
试管号
1 : 20
1：10明性血清
抗原效价判读举例表
1: 200
注：册为0%溶血；册为25%溶血；H为50%溶血；+为75%溶血：一为100%溶血正式试验
红细胞
标准阳性血清和标准阴性血清使用前用VBD作1：10稀释，56℃水浴灭能30min；被检血清使5.1
用前用VBD作1：10稀释，灭能30min（牛：56C～57℃：绵羊、山羊：63C）。#按表8建立正式试验。
表8补体结合试验正式试验操作表试管类别
1:10被检血清/μL
1：10阳性血清/μL
被检血清
试验管
对照管
红细胞
试管类别
1:10阴性血清/μL
2单位抗原/μL
2单位补体/μL
致敏红细胞/μL
SN/T1087—2002
表8(完)
被检血清
试验管Vv99.net
对照管
4C感作12h~18h后再置室温10min50
红细胞
37C感作30min后进行初判，然后置室温2h、水平转子离心机2000r/min离心5min或置4C冰箱中过夜后进行终判
5.2判定
5.2.1先观察对照管结果。当阳性血清孔和红细胞对照孔出现100%抑制溶血.阴性血清对照孔、抗原对照孔、补体对照孔及被检血清对照孔均出现100%溶血时判定被检血清结果。5.2.2
对比标准溶血孔（见附录A)对被检血清管进行判定，并作如下记录：册
表示90%以上抑制溶血；
表示75%以上抑制溶血；
表示50%以上抑制溶血；
表示25%以上抑制溶血；
表示100%溶血。
判定标准：被检血清1：10稀释时小于50%抑制溶血为阴性。在进出境动物的检疫中，对判定标准有规定的按规定执行。
SN/T1087-2002
(标准的附录）
标准溶血孔配制
A1血红蛋白溶液的制备：取2%绵羊红细胞悬液1.0mL，加人装有7.0mL蒸馏水的试管内，充分振荡，使红细胞全部裂解，再加入2.0mLVBD，充分混合；A20.2%绵羊红细胞恶液的制备：取2%绵羊红细胞悬液1.0mL，加入VBD9.0mL；A3按表A1配制不同溶血度的标准溶血管，并充分振荡均匀。表A1
溶血度/%
血红蛋白洛液/mL
0.2%绵羊红细腹是/mL
标准溶血管配制表
A4从标准溶血管配制表的各管中，分别取125μL加人微量板的对应孔，轻摇混勾后静置，待红组胞全部沉淀于孔底后用于试验判读的对照。SN/T1087-2002
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
牛Q热微量补体结合试验操作规程SN/T10872002
中居标准出版社出版
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
电话：6852394668517548
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷.
开本880×12301/16
印张3/4
字数10千字
2002年5月第一版2002年5月第一次印刷印数1-2000
网址www.bzcbs.com
版权专有侵权必究
举报电话：（010)68533533
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。