本标准规定了饲料巾盐霉素的微生物榆验方法和高效液相色谱仪柱前衍生化检验方法。本标准种方法均适川于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中盐霉素的测定。最低榆出限为1.25 mg/kg。其微生物检验方法为仲裁法。本标准高效液相色谱柱前衍生化法也适用于盐霉素预混剂中盐霉素的测定。

[CS 65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T20196—2006
饲料中盐霉素的测定
Deteiination of saliuomycin in fcedx2006-02-24发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准花管理委员会
2006-07-01实施
标在百司国内外文能基二·提工定料中些带测定以种方法：GR/T20196—238
第伙为鼠生特检盈法（炸放法）微生物验验方法！要每专了我职过出一麦面全验局673一出口肉及内制品中盐靠素热留最快法滋纸片法日本厚牛省年编的定声、水产食品中的减望物压检验方法中带西东施南质检划为法制定的，其力法原理微生物检定探作步举基作司，法的范、称样卫试样提表条件进行了改达，改世意术内容如下：-将据.区液而中醇.四票化我分离提取改券用目醇和水自强整取：士先对计胶再过教化部层桥在冷化要工接公化器质析柱净化。第二法为高效位讲.前衍化法，款Joura.atch:amangnlyA19报导与效波相语性前衔牛化法测定动物料中拉沙事举索，典能需素、就臣案，口至进专>制定、基方法原理、基本探作品骤相同方法的随，证样量根据试验进行改进，收详技术为弃知下！“本标注总回动用一合创料液端何、均限合河机益每系预准剂，较文款比大：一本标准称样且、站单充提取料需师白见射求A，以上沟种方法均培如丁“垂象性”：在标弹的间永B、时（为见范性录，网限A为资料性附录.本标准户全区长料协化技术整尚会提作山厂，本标证起益单位；国家间格质期监督检冷中心（武义！。本长波起五人：刘小敏，张勇高利何·-帆1菠围
饲料中盐霉泰的测定
GR/T 0196—20CG
大标准期定了的料宁盐需索微牛检验方法册高效微相港文柱前舒生化检验方法。本标准两种方法均适用配合同料，波箱饲料.添文剂预很合间粒中盐存素的测定，最低检限为，2。其缴土赖疫验法为作裁法。小示推高效波相色消在前衔生化达也适片于益需案换混刘中让筹素的创定
：蓝单位相的
2规范性引用文件
下列文件中的亲款过过本标准的用而成为本坏准的条款，凡注口期的用文件，其随斤F有的您改中（不包活前证旁）或提版均不用于木标液，然装册情光标确必成协议的各点究否可使用这些文件的最新量，化后个注期的以可文竹，具最新版本适市宁本标准。4别.」食品生然生物学格验总则CB/T5332分析实验室用水制格和式整方法GT1!1词，采样
3方法1：做生物检骤方法！仲效法：3.1原理
乐只即和水是取诚样一盐费素，是取带过气比铅原所信净化，降大向求中的！批件物质：法脱设路希整（或策缩）利片试浪口盐东与呼热脂防泡打函作用产/：押单图，根握抑菌人小用标准而绒法定测定密含
3.2试相和材料
除说，三分一仪他用确这分折纯的试和蒸谢求或高于成的当纯度的水.3.2.1日再溶夜
3.2.2氧化铝
27上343F，签0℃净化：1，1于换然冷年各月：3.2.3鼠化铝层拆柱
持活化氧化侣装坑人层折机中户2imm，内径mm付经轻拍杆垒氧化表面不可下译，化的高宠为~m。
3.2.4试验菌种
本热指防型灯菌（Barlissierotheinphsiwvu，calitotetit3.2.5盐毒末标准溶液
3.2.5.1站两求标准独备溶液
联等系标准：9101263置于33存量此咨解择至度，授为率为1：量成筑市，右效期满，3.2.2.2盐需求标准中间商
信移取心以标准各满（325.！！10m.管瓶，用巴孕格降至度择其液度到m。当限制和这用
CB/I20196—2CC6
3.2.5.3盐雷者标准工作溶液
办刷注确移取定单需需素索中间液<3.2.5.21,用用醉落液（3.2.1)权释成液渡为5.C℃1gm、10.心*L.-3.0g/ml20.0/二25./r的标准！作教，其5.0gm为参专液读的标准工作波，以上培液须当H配制和使上：3.2.6培养基
时录可定制备。
3.2.7葡浮液
嗜热脂肪素疗:岗接种于流养基 T内,一(55+1)塔养(17—1)h、于 3 000 t:mn高心15 mir,奔人层液，门人道量理盐实商心，反选资，选液：最点人3生理益衣制成询基浮液，冰保存，该降液可快尚~用
3.2.日验定平板豹制备
在制平板前，允效上牛洋杯适人0,101r1的：:L液度的标准二作：3,2. ,3对菊甚液的用代用量进行预诚，以不同量的在思液加人签培化冷却车的～！物培获英充分很合，于（5上场1)h后，施择驱语核浓质标增作微产生直径12：潜所，完整特评述离花齿波用止佳开：
1火岸血中人2屏化升冷卸举0培养，保持水乎待共凝叫后制成草。再江人已加人最佳H是虚良没的培养品！，促拟水平，使其凝固制我核定做：所可平板需当下制备。
3.3仪器与设备
3.3.1信十火菌锅或火问箱
3.3.2怀湿培养销：61=、5.两披保持水?.3. 3. 3旋转点空变发类。
3.3.4 既药器;往复式
3.3.5离不J70g（9/mi)。
3. 3. 6 资标卡尺;测表范围 0 mm ~2 cr.1:情度 0. 02 ms或拍齿测量变,3.3.7持养血：有伦90rr.m.底部产整光消的效再而.总污瓦益。3.3.8午等补：南径6.m高：m3外经7.8mm的小销销管，3.3.9可调蒙量移没，20..1uurl..法：可谢设基资器需经拉
3.3.10安验牢营波势器血，
3.4试样的到备
按11/下1-99.1实料采样方法求样，选欧河利样品重少50表四分法端两至少10，南，通过D.m引跨.沿么次人密闭容器中.光低盟保备用3.5分析步骤
3.5.1试浓制备
9.5.1.1微作物实收军签探作许总通投（H4附，执3. 5. 1.2 准确系取监样,抗确至0. 000 [ 5：」250 ml.H率二角临中,准确加人20, m.. 样品按收液3.？._！，往复拆药器.多端1h.能旨片剂全部转秘到满备好的实化招杜（3.之.3)中：用栏品提取铱%211不地选貌，用10，会且再按收举刻度。3.5.1. 3根据是取液(..7.21十站每严计浓度(依据析示进，称样量和接原液量喷定分取量，参卫的求A吸一定让诺液.5.三暨于怕转然发能中，减下至1。加人适量提取载（1.1称可以用：款川的代件可的仪需、2
择试没盟得教管量
3.5.2标准曲线的制备
CB/T20196—2006
以0R1来变内标硅工作被作为至专浓度，标准曲载三的每个准液度各取个检定平板为一组，在每个半板上效置6一年半杯，读冲杯在平径为2%的圆面1成\归：其中3个牛杯滴加的多考浓度，另消.其但一-的准作液，参考报底宿箍标准浓溶液学叫两敬有，种浓3的标准工作共用2个检定平恢。将图瓦盖益好，于4：效百1h-2h后，在<55二1)培养17±Jh，除去牛净朴，扩确地测量所产土的抑案斑：描确到0.11m)，求出每组3个检定平上5.1/度的钟曲关自经读数（B)与其他浓虚标被的抑菌班径读教的平为值（八），再求出意考浓度（5，以/m1.>能所有36个拍商斑径数的片值（，用考度迎案径的平值！与每组个参专度菌若径平信（B)之差来校正其化齐银要标准工作满的排剂款读数的平内百（A）。以游限浓变为锁坐标该溶液效校上尼的：中首买的自径A力纵收标，约到标准曲线图或计效归为。
校止接式1计算：
A-B--A
夜校的冲菌逛点径读激，为意米nr称准则温蒂成即案在自轻凌数总平均值，单位为款米（m）：教校正波组内的标对照落接抑的庭平均读致，单位为言米（mm）：A
收更率液的抑谨百径的半沟读效，单位为名米（mm:！3.5.3测定
准份推浪币二个检完平报，在每个了板上效骨个牛净杯，使牛决邦在半稳为28m的面1或5布间距。其中3个一冲称满加.1mL样激，分个滴加0.1m.存考浓（500/m.的标准工作液样液上参考淡度标准1%波要间放置。将断瓦盖盖好，于4放12证，士（51)关(?，【)h：除太牛件，材哨地测量所产抑菌斑的直径（拓确测，1m，校正后.求其平值：
3.6法果计算
3.6.1如推效率境报齿图点径小十12mm，即根告\压性如样液呈现抑蓝两卢任平沟值大于等于12口而：经校正后：从标准山缆上声出或计弹相应点存的涨度，按式2)计粪试详中盐再末含量。如定结果为二性，中所是冲虚腾点径平均值大下等12m.必变正·尚达行确证验（可用生物自品影多州的求以外迎菌物矿益意：3.6.2间权中带存本含量式（2)节：weXn
式中：
试样益季系范含用：争京每下克（mR.kR)：从标准曲线含出的鲜波中适避素密度，单位为新点千（/）：7择倍数！
称试的，单为克！
3.6.3、定果书算半抢值示保率：消效数学。3.7重复性
在再安性悠件下武标的两次独制试结果的润定值的绝时关拍，(2）
GH/T2C196—2006
盐要素的含量%4.0010”mg/kg对，本对钟术了值的%；盐再来的含量>l.Y1mg/kg时，不超过算术单值的10%4方法2:高效液相色仪柱前衍牛化检验方法4.1原理
用中再盘联让中小穿案，以2二栏亲英NP为行生前应用点效相色详栏萌征牛化法果用案外检测器对词料中的盐露求洗行测定4.2试剂和材料
除非为有说明，收垂用分齐试列，4.2.1水
Ge/16682数
d.2.2三期乙缺溶注
4.2.3甲醇
色语纯：
4.2.4衍生化试滴
c=.51g/L：称取5mg2，4-硝基益置T100ml.容量培一.用甲醇充分解后烯释至对度。
4.2.5提取液
用口与
4.2.6盐霉索标准溶液
4.2.6.盐每表标准厄备离池
精确称取每钢标准品（含量41016，骨3）册用中溶解秘举至到授，箍，意为1/.置箱有效期二。4.2.6.2盐末标准工作溶液
分准确移取1.0w:I.-2.00mL标准陀备液：4..S.1>=111m1.客止瓶中用甲醇稀释至刻度，其浓度分别10110.m现配现用。4.2.7流动相
将-，mL冰2转（优统纯）入mL水中，并按10：90的比价和甲晚派介，见萌超或做具他脱气处理，
4. 3 收器与设备
4.3.1实验室常用球周益而，
4.3.2满鲜，女式。
4. 3. 3转息本款发验，
4.3.4离心就不恬于7g！/min
4.3.5微举证会器
43.6调做量105.100--203--0002注3：可两激反感液%经过校准
3.产高教液扫色落仅：配有四送灵，源销，紫外V)或二拨管阵列检测器，S色讲招妇粒4:长-5 m,径.m.
4.4试样的制备
.1词料来样泌采联饲料品至少分法维减至少0磨通过0.233F码，尚均装人密闭容能中，避光低益保存备出4.5分析步睾
4.5.试疫提取
GU/T 20196—2006
4.5.1称表一定点试拦参时录4精确至1，于m座三自瓶中.准喷人二0.0m样右供区液4.2.)充行支荡戏上录荡1上静道片刻区F请液二0 十心中，以. 000g(2 533 r/min:4.2 10 mir..1.5..?如带将试被浓靠，根据提取滤（1.5.1.1：小盐尊系预计染3依据标示量，序情量和提取能案班定分取盘意附录人吸取定取获4，1，普北英转热究器戒压免于、再比样品接取浓（4.2.）.使试液中盐要索含早为/10)/ml.4.5.2读液衍生化
可证微最移效提4.3准怖吸取消滚于具频的高心管中信境加人(氯酸求溶范（1.2.)益紧后生微型滤益上混旋2）5充温收骨10)min，山准猫1人200I一硝基本衍型化试液（4.2.4)益紧向样源放2℃：后，带F5不浴锅中及序30m1心，取出：待冷划后进行检测。
如发现衔牛化较混涉，临？300g（sc331/min）离心示，收上清散上抗测是。4.5.3标衍生化
用可调微量称添器（3准确吸取10：23000n每素标准作液（4.2.5.2十只端口的高心中，中晚种率7027设1-1空广管70l.朗作对照，胺4.3.2期生化方法的牛。4.5.2测定
4.5..1高效液相色谱仪（HIPLL)制定替数的没定色恶柱：011sC：拉.校压4m11:关151 rm内价3.51r或它能美似的分研格。抖漏：C.
流动扫：4.2.71.0l。
格测器，紫外(UV)取一授管丝列格测器。格测波长：3921.
逆样量.13 ...-23 ...
1.5,4.2定性.定量测定
收适正的4.5.2我得拍衔生化试疫利用应变的.5.衍三化标准下作液进1划定：以保到时间式衍生液紫外光区特证光估定性。以色造括面积数分值做单点或象点校准定。2.6结果计算
4. 6.1间料.中益萨表含量按式(3计筑：F:XVNAV&A
T.xmxyXVi
中每的含量，单位为名年克（mg/kg），标难1获街化雍口，4中盐每系世，单位是克年克mR：kgP
标准工牛波衔生演性面积宜：
标准工产资汽生施进样床！，平位灯款升（运样街土波梯面积值：
样衍生废进样述，中位为微开α）；伴本和.单位为r:！；
客与行生的试范体积4..2单位为名税释成浓缩倍数
称衣式样的质质，尊位为克）。)
GRT20196—2006
4.6.2中1谢定结具用算术平均值表保留3位有效数疗。重性
在重其性条件下缺得的两次独文测试站果的测定值药绝对举位：一需每系的含量4.0%×/kg时，不期在算术与值的15%；益每毒的今且4.(C×：0°/k时，不超算术平也值的10%F
（资料性对录）
试样的辞样量
:BT2015E—2006
举出间料样品标示量、称样量及盐寻充提收获稀择度示例。见势4，1，表4.2，表A，词料样品示示盘，称样量及盐氧素提取液稀释度（微生物检验方法）北带景尔示量/
饲科类别
预问合饲科
陈缩克料
配·合饱样
饲科态别
印泥剂
预很合实料
浓缩饲料
CaRkgi
7 635 000
a：000
s/tng/:L)
或技酒颜儿
饲料样品标示量称样量及盐素规取液蒂舜度(IHPLC)站效心示量！
Cug/kg?
Ix: non d
: x:3 ano
30: 000
疼样里
热联液V
提联获显中
协联液初栏
成培做
动谦预计
微度/
(rgim_)
GB/T20196—2C06
R.1培养基 1
B. 1. 1 成分
瓮白豚免费下载标准就来唯久标准网
燕化钠
榨斗澄湾
H, 1. 2制法
附录B
！规范性附录！
培养基和试相制备
- 300 m
净上述各成分」水热率赔周节1的7.1二3.分安干试管中，131灭由13m，制式斜面蛋用，
培养星Ⅱ
E.2.或分
读蛋点购
花萄糖
B.2. 2制法
I occ rf.
将注务成分三水中加点落群.调价H销2.3上0.1.分十确形瓶中.于！2它次暨：5mm，H.3理盐水
称取8.5g氟化，落于1L水中·于.21℃高压火南15xin：6
、1原理
附录汇
【规范性附录）
微生核检验方法确证试验
GB/T 2019G—2006
确证试验来用气轮自层影咨：用标准拍作对照，R值，以萨格践中存在的抑菌物灵否确实是盐每东，
C.2生物自显影法条件
C.2.1薄层板
股Q/1125?-e用前活化h
C.2.2点样量
L.点状.
c.2.3展开
在地利内行
心2.4险
格个样波晟标业溶液分期点东匹块海层板上先下每块薄层成一品2cm处明条基能：然后店这考上别点2）m详激利2.0“Rml益再系标准格液，成液标准被点相距=.：m，在收中书中肺进行展T，举筑剂消裁距核预带1，处为止，取山源层表，风一后培养所将谢层拉置于高灭座的长形培养在无件下将化冷至50品的生构自显影市培养减T勾地项在其表而上，然后用1\，二述接将饱用忠来的落养基止铺满整个满层版，保持求平，化其凝固（一2)培养（7：）丝过培养了，在游层我盐带注激产种离的，位州间位，名的适护自煌品西来。
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