免疫荧光 定位今天考研,考一道免疫荧光的问题,叫我说出一种实例我是这样回答的：比如想知道一种蛋白质在细胞内的定位,可以用一这种蛋白质为抗原的抗体加上荧光标记,注入到细胞内,根据荧光便可以确定此蛋白在细胞中的位置我知道我这样的回答是不对的,请问我这样大概能得几分?
2019-06-15
免疫荧光 定位
今天考研,考一道免疫荧光的问题,叫我说出一种实例
我是这样回答的：比如想知道一种蛋白质在细胞内的定位,可以用一这种蛋白质为抗原的抗体加上荧光标记,注入到细胞内,根据荧光便可以确定此蛋白在细胞中的位置
我知道我这样的回答是不对的,请问我这样大概能得几分?
优质解答
你所说的方法是采用荧光素分子直接标记抗体,在免疫荧光中被称为直接法.
更多的做法不是采用直接法而是采用间接法,也就是用对应某一种抗原的抗体（这里被称为一抗）与细胞孵育结合,在采用对应一抗（也就是抗一抗）的抗体（这里被称为二抗,二抗上偶联有荧光素分子）与细胞孵育结合后在荧光显微镜下观察.
间接法较直接法能够有效降低背景荧光,提高信噪比,同时由于抗体的放大效应使得检测灵敏度大大提升.
我就在做这方面的研究工作,如果需要的话可以共同探讨.
举例：对细胞微管蛋白进行亚细胞定位,用低聚甲醛固定细胞,NP-40穿孔,选择抗微管蛋白的抗体作为一抗,孵育后洗脱去背景,加入偶联荧光素的二抗孵育后洗脱去背景,上荧光显微镜观察.
希望能够对你有所帮助.
你所说的方法是采用荧光素分子直接标记抗体,在免疫荧光中被称为直接法.
更多的做法不是采用直接法而是采用间接法,也就是用对应某一种抗原的抗体（这里被称为一抗）与细胞孵育结合,在采用对应一抗（也就是抗一抗）的抗体（这里被称为二抗,二抗上偶联有荧光素分子）与细胞孵育结合后在荧光显微镜下观察.
间接法较直接法能够有效降低背景荧光,提高信噪比,同时由于抗体的放大效应使得检测灵敏度大大提升.
我就在做这方面的研究工作,如果需要的话可以共同探讨.
举例：对细胞微管蛋白进行亚细胞定位,用低聚甲醛固定细胞,NP-40穿孔,选择抗微管蛋白的抗体作为一抗,孵育后洗脱去背景,加入偶联荧光素的二抗孵育后洗脱去背景,上荧光显微镜观察.
希望能够对你有所帮助.