本标准规定了婴幼儿食品和乳品中β-胡萝卜素的测定方法。 本标准适用于婴幼儿食品和乳品中β-胡萝卜素的测定。

中华人民共和国国家标准
GB5413.352010
食品安全国家标准
婴幼儿食品和乳品中β-胡萝下素的测定National food safetystandardD)etermination ofβ-caroteneinfoodsforinfants and young childrenmilk and milk products
2010-03-26发布
2010-06-01实施
中华人民共和国卫生部发布
GB5413.35—2010
本标准部分参考了国际分析家学会（AOAC)2005.7β-Caroteneinsupplementandrawmaterial的方法。
本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。本标准系首次发布。
1范围
建筑321---标准查询下载down.jz321.net食品安全国家标准
婴幼儿食品和乳品中β-胡萝下素的测定本标准规定了婴幼儿食品和乳品中β-胡萝卜素的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中β-胡萝下素的测定。2规范性引用文件
GB5413.35—2010
本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。3原理
试样经皂化后，使β-胡萝卜紫完全变为游离态。用石油整萃取后，反相色谱法分离，外标法定量。试剂和材料
除-非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB.T66S2规定的一级水。4.1α-淀粉酶：酶活力≥1.5U/mg：4.2无水硫酸钠(NazS),）。
抗坏血酸(CH,0,）。
有油醚：沸程30℃～60℃。免费标准vv99.net
甲醇(CH,O)：色谱纯。
乙腈(CHsN)：色谱纯
三氯甲烷（CHCI）：色谱纯。
正已烧（C.H4）：色谱纯。
乙醇：体积分数为95%。
氢氧化钾溶液：称固体氢氧化钾250g，加入200mL水溶解。临用前配制。β-胡萝卜素标准品。
β-胡萝卜素标准溶液。
β-胡萝卜素标准储备液（500μg/mL）：准确称取β-胡萝卜素标准品（4.11）50mg（精确到0.1mg），用正已烷（4.8)定容至100mL棕色容量瓶中。注：β-胡萝卜素标准储备液需要一10℃以下避光储存，使用期限不超过3个月。标准储备液用前需校正，具体操作见附录A。
4.12.2β-胡萝卜素标准中间液（100μg/mL)：从β-胡萝卜素标准储备液（4.12.1)中准确移取10.0mL溶液于50ml棕色容量瓶中，用正已烷（4.8)定容至刻度。4.12.3β-胡萝下素标准工作液：从β-胡萝卜素标准中间液（4.12.2)中分别准确移取0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL济液转入5个100ml.棕色容量瓶中，用正已烷（4.8)定容至刻度，得到浓度为0.5、1.0、2.0、3.0、4.0g/ml的系列标准工作液3
仪器和设备
5.1高效液相色谱仪，带紫外检测器。-
GB5413.35—2010
旋转蒸发器。
恒温磁力搅拌器：20℃80℃。
离心机：转速≥5000转/分钟。
分析天平：感量为0.1mg。
氮吹仪。
培养箱：60℃±2℃。
分析步骤
试样处理
6.1.1淀粉类试样
称取混合均匀的固体试样约5g或液体试样约50g（均精确至0.0001g）于250mL三角瓶中，加人1.0g抗坏血酸（4.3)，围体试样需用50mL45℃～50℃的水溶解并混合均匀。加入1ga-淀粉酶（4.1)，向三角瓶中充氮后盖上瓶塞，置60℃士2℃培养箱（5.7)内酶解30min。6.1.2非淀粉类试样
称取混合均匀的周体试样约10g或液体试样约50g（均精确至0.0001g），置于250mL三角瓶中，加人1.0g抗坏血敲（4.3），周体试样需用50mL45℃～50℃的水溶解并混合均。6.2待测液的制备
6.2.1皂化：将00ml95%乙醇（4.9)加人到上述试样液中，混匀并加人25mL，氢氧化钾溶液（4.10）混匀，放人力馨，充人氮气排出空气，盖上胶塞。将1000mL的烧杯中加入约300mL的水，将烧杯放在恒温硅动摊拌器（5.3)上，当水温控制在53℃士2℃时，将三角瓶放人烧杯中，磁力搅拌皂化约45min后，取也立刻冷却到室温。6.2.2提取：将鲁化液全部转入500mL分液漏斗中，加人100mL石油醚（4.4），轻轻播动，排气，盖好瓶塞，室温下振荡0min后静置分层，将水相转入另一分液漏斗中按上述方法进行第二次提取。合并有机相，用水洗至近史性。有机相通过无水硫酸钠（4.2）过滤脱水。滤液收入500mL烧瓶中，于旋转蒸发器（5.2)上在4QC±2℃的充氮条件下至近干（绝不允许蒸干）。用石油醚（4.4）溶解残渣并转移至10mL容量瓶中定容。
从上述容量瓶中准确移取2.0mL石油醚溶液于10mL爆盖试管中，在40℃士2℃氮吹仪（5.6）上吹于。向试管中加1.0mL正已烷（4.8），振荡溶解残渣。再将试管以不低于5:000转/分钟的速度离心（5.4)10min，取出静置至室温后待测。注：实验操作过程中应注意避光。6.3色谱测定
6.3.1参考色谱条件
色谱柱：Cl柱，250mm×4.6mm，5um，或具同等性能的色谱柱。流动相：三氯甲烷-腈-甲醇z=3十12十85，将1L的流动相中加人0.4g的抗坏血酸，经0.45μm膜过滤后备用。
流速：2.0mL/min。
检测波长：450nm。
柱温：35℃±1℃。
进样体积：20l。
6.3.2标准曲线的绘制
分别将β-胡萝卜索标准工作液（4.12.3)注人液相色谱仪中（色谱图参见附录B)，得到峰面积。以峰面积为纵坐标，以β-胡萝下素标准工作液浓度为横坐标绘制标准曲线。2
1铭39
准香下我欧
3试样测定
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将待测液（6.2.2）注人液相色谱仪中，得到峰面积.根据标准曲线得到待测液中β-胡萝卜素的浓度。
分析结果的表述
试样中β-胡萝下素的含量按式(1)计算：X_cX10×100
式中：
试样中β-胡萝卜素的含量，单位为微克每百克（μg/100g)；c
++........
从标准曲线得到待测液中β-胡萝卜素的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；试样的质量，单位为克（g）；
样液体积。
注：此计算结果为顺、反式β胡萝卜素的总量。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。其他
本标准检出限为2μg/100g。
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附录A
（规范性附录）
标准溶液浓度校正方法
β-胡萝卜素标准储备液配制后需要校正，具体操作如下：取β-胡萝卜素标准储备液（浓度为500μg/mL)10μL，注人含3.0mL正已烷的比色皿中，混匀。测定其吸光值，比色杯厚度为1cm，以正已烷为空白，人射光波长为450nm，平行测定3次，取均值。按式(2)计算溶液浓度：
式中：
X---β-胡萝卜素溶液浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；A-β-胡萝卜素的紫外吸光值；
.（2)
β-胡萝卜素在正已烷溶液中，入射光波长为450nm，比色杯厚度为1cm，溶液浓度为1mg/.的吸光系数为0.2638；
测定过程中稀释倍数的换算系数。建筑321-
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建筑321---标准查询下载down.jz321.net附录B
(资料性附录）
标准品液相色谱图
β-胡萝卜素标准品液相色谱图
β-胡萝卜素标准品液相色谱图见图B.1。AU
β-胡萝卜素
β-胡萝卜素标准品色谱图
GB5413.35—2010
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打印H期：2010年6月21HF009
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开本880×1230
2010年6月第一版
印张0.75
字数8千字
2010年6月第一次印剧
书号：155066·1-40175定价16.00元由本社发行中心调换
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