本标准规定了食品中17 种2,3,7,8取代的多氯代二苯并二英(PCDDs)、多氯代二苯并呋喃(PCDFs)和12种二英样多氯联苯(DLPCBs)含量及二英毒性当量(TEQ)的测定方法。 本标准适用于附录A 的表A.1中规定的食品中17种2,3,7,8取代多氯代二苯并二英及多氯代二苯并呋喃(PCDD/Fs)和12种DLPCBs含量及其TEQ 的测定。 本标准的检测限:2,3,7,8四氯代二苯并二英(2,3,7,8TCDD)和2,3,7,8四氯代二苯并呋喃(2,3,7,8TCDF)为0.04ng/kg、八氯代二苯并二英(OCDD)和八氯代二苯并呋喃(OCDF)为0.40ng/kg、其余PCDD/Fs为0.20ng/kg、DL-PCB为1.00ng/kg。

ICS 67. 040
中华人民共和国国家标准
GB/T5009.205—2007
食品中二英及其类似物毒性当量的测定Delermination of toxic equivalencies of dioxin and dioxin-likccompounds in foods
2007-10-29 发布
2008-04-01实施
中华人民共和国卫生部
国国家标准化管理委员会
数码肪快
GB/T 5009.205--2007
试剂和材料
仪器与设备
试样制等与净化
PCDD/F*色质分析
DL-PCBs的色质分析
结果的计算与报告…·
.............................................量保证(QA)和质量控制(Q).
分析过程中的·干扰及消除
染防护和废弃物的管理
附录区（规范性附录）多氢代举并睡英及吡喃和喽英样多联笨牵性当量因子附录B(规范性附录)
附录（（规范性附录）
附录D(资料性附录）
附录E(资料性附录)
标准溶液
测定方法的技术要求
索氏提联装置及分析流程图
精密度
..........................................................................13
GB/T 5009.205-—2007
本标准参考采用美国环境保护局（EPA)的“多氯代二苯并二嗯英及多氯代二.举并峡喃（PCDD/Fs）高分辨气相色谱高分辨质谱法（Tetra-throughocta-chlorinateddioxinsand[uransbyisotopedilutionHRGC/HRMS，EPA1613---1997)”和水土壤、飞灰和牛物样品中多氯联苯（PCBs）的高分辨气相色谱-高分辨质谱法(Chlorinattedl biphenyl congcners in water，soil,sediment， biusulids and tissue byHRGC/HRMS,EPA1668A 1999)\
本标准与EPA1613—1997和EPA1668A—1999方法的不同之处如下：建立了针对世界卫生组织(WHO0)已经规定毒性当量因子(1EF)的17种2,3,7,8位氯取代的PCDD/Fs 和 12. 种二溅英样多氯联苯(DL-FCBs)的同时测定方法；将EF416131997和EP41668A--1999斤法合并，建立一英及其奖似物的毒胜当量（TEQ)测定力法：
增加了有关利用液体管理系统(FMS)进行全自动净化处理力法，发展了全面有效的净化技术。
本标准的附录A附录B和附录为规范性附录，附录L和附求E为资料性附录本标推由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准由中国疾病预防控制中心营养与食品安全所负资起草，中国科学院生态环境研究中心、深圳市疾病预防控制中心、渐江省疾病预防控制中心和北京大学参加起革。本标推主要起草人：吴永宁，郑明辉、李敬光、赵云峰、张建清韩见龙、陈左牛，GB/T 5009.205--2007Vv99.net
国际食品法典委员会（CAC)的食品添加剂与污染物委员会（CCFAC）将具有毒性当量的一嗮英及其类似物列人制标议程，正收集食品中二英及其类似物的污染水平和人体暴露数据，并制定了控制食品染措施的操作规范，欧盟七经制定子包拆食品中多案代三莱升二暖宠及多氯代三装并味瞻(ICDD/Fs)和二嗯英样多氯联苯(DLPCBs)在内的一嗯英及其类似物萨性当最（TEQ)允许限量标推。为了对食品中二嗯英及其类似物进行有效监控，需要发展国际认可的超痕量分析技术。食品中二嗯英及其类似物分析属超痕量（pg-Ig）多组分（多氟代二苯并一英(PCDDs)有75 种、多氯代二苯并呋(PCDFs)有135 种,PCBs 有 209 种同系物异构体)和复系的前处现技术,对特异性.选择性和灵度的要求极高，成为当今食品利环境分析领域的难点，其检测能力体现了一个国家在该领域的研究水平。
美国环境保护局（EPA）根据二呕英及其类似物痕量分析的技术费求，来用同位稀释的高分辩气相色谱-高分辨质谱联用技术（HRGC-HRMS)分别建文测定PCDD/Fs的EPA1613标准方法（1997B版）和测定多氯联苯的FPA1668A---1999方法，以满足一曙英及其类似物的超痕量分析需要。本标准修改采用EPA1613-1997方法和EPA1668A1999方法，提出适合我国的检测食品中二英及其类似物疫量蛊要的标难化方法警告：
1.PCDD/Fs和1L-PCBs为剧毒化合物：并具有致癌性和生殖内分泌毒性。为此.处理含PCDD/F:和 DL-PCBs 样品应与放射性物质或传染性物质一样,值得高度重视。2实验室应具备良好的通风条件，同时应严格控制出入实验室的人员。引 本标准中所用的试剂和化学品都有一定的毒性，对健康具有潜在的危害,应尽量减少接触。操作PCDD/Fs和IDL-PCBs的人员需要经过安全知识培训,且训练有素4.推荐实验室购买经过稀释的标准溶液。如果需要制备储备溶液，应在通风橱中进行，并且应戴上防毒面荤。
1范围
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食品中二英及其类似物毒性当量的测定本标准规定了食品中17种2.3，7，8-取代的多氯代二苯并二嗯英（PCDDs）、多氯代二苯并呋喃(PCDFs)和12种一.嗯英样客氯联茉（DI-PCBs）含量皮.二岖英毒性当量（TEQ>的测定方法本标准适用下附录 A的表 A. 1中规定的食品中 17种2,3,7,8 取代多氯代二苯并一嗯英及多氯代二苯并呋喃（PCDD/Fs）和12种DL.PCBs含量及其TFQ的测定。本标雅的检测限:2,3,7,8-四氯代二莱并二嗯英（2,3,7,8-TCDD)和 2,3,7,8 四氯代二苯并峡喃(2,3,7,8-TCDF)为 0. 04 Hg/kg、八氯代一苯并一喽英(OCII))和八氯代一苯并呋喃（0CDF)为0.40ng/kg、其余PCDD/Fs为0.20ng/kg、DL-PCB为1.00ng/kg.2原理
应用高分辨气相色谱-高分辨质谱联用技术，在质谱分辨率人于10000的条件下，通过精确质量测量监测日标化合物的两个离了，获得目标化合物的特异性响应。以日标化合物的同位素标记化合物为定量内标,采用稳定性同位素稀释法准确测定食品中 2,3,7,8 位氣取代 PCDD/Fs 和 DL-PCBs 的含量；并以各日标化合物的毒性当量因子（TEF)与所测得的含航相乘后累加,得到样品中一嗯英及其类似物的声性当量（TEQ）。
3试剂和材料
3.1有机溶剂
以下有机溶剂与为残级，浓缩[000倍后不得检出二嗯英及其类似物。3.1.1丙酮，
3.1.2止烷。
3.1.3甲萃。
3.1.4环已烷。
3.1.5二氯甲烷，
3.1.6乙醚。
3. 1.7 甲醇。
3. 1.8证王烷。
3.1.9兄辛烧。
3.2标准溶液
3.2.1CUD/Fs标准溶液
本标推推荐使用EPA16131997规定的标准游液，各实验室可根据具体情况选用相当的标准品。3. 2. 1. 1校正和时间窗口确定的标准溶液(CS3W'I 溶液);用于烷配制,为含有大然和同位素标记FCLDI)/Fs(定量内标、净化标准利回收率内标)的落液，用于方法的校正和确证,并可以用于DB5毛细管柱(或等效柱)时间窗口确定和2,3,7,8-TCDD分离度的检查(见附录B的表B.1)，3.2.1.2净化标推溶液：用T:烷配制的\Cl-2,3,7,8-TCII)溶液（浓度为40ng/1nl.土2ng/ml.)3.2.1.3同位素标记定量内标的储备溶液：用王烷配制的1心PCDID/Fs溶液（见附录B的表B.2）3.2.1. 4回收率内标标准溶液，用毛烷配制的\3C-1,2,3,1-TCDD 和13-1,2,3,7,8,9 HxCDD溶液(见附录 B 的表 B. 3),
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3.2. 1.5精密度利回收率检查标准溶液(PAR):用主烷配制的含大然 FCII)/Fs液(见附录 B的表B.4).用于方法建立时的初始精密度和回收率试验（IPR)及过程精密度和向收率试验(OPR)。3.2.1.6保留时间窗口硫定的标准溶液（TIDTFWD):用于确定规定毛细管柱中四氯至八氯取代化合物出瞻顺序.同时用于检查作规定的色谱杆中 2.3，7,8-TCIL) 和2,3,7,8 TCDF的分离度（见附录E的表 B.6）
3.2.1.7校正标准溶液：为含有天然和位素标记的PCDD/Fs系列校正溶液（见附录B的表B.7)，其中CSL为浓度更低的天然PCI江/Fs校正溶被，用质谱系统饺正。测定饺正标雅辫液，可以获得大然与标记PCDD/Fs的相对响应因子(RRF）。此外,CS3 用已建立RRF 的[I常校正和校正曲线校验(VER);CSI用于检查HRGC-HRMS应具备的灵敏度。出丁食品要求的灵敏度生低，可以使用 CSL进行灵敏度检查。
3. 2. 2DL-PCBs 标准溶液
本标准推荐使用FPA1668A一1999规定的标准溶液，各实验室可根据只体情况选用相当的标雅品。
3. 2. 2. 1.时间窗口确定和定鼠内标标准落液:用烷配制的含同位素标记 DL PCBs 的溶液(见附录 E的表8
3.2.2|2同位素标记的净化内标标准落液：用主烷配制含131z-2,4,1°-IrPCB,1C12-,3,3°,5,3-PcPC和13C12-2,2°,3,3',5,5',6 HPCB溶(见附录 B的表 B. 9)。3.2.23同位素标记的回收率内标标准溶液：用王烷配制含1\C12-2,2\，5,5″TePCB.1C2,2°，4',55-PePCB、C1-2,2.3,1,1,5-HxPCB和Ci2-2,23,3,4,4,5,5-OctaPCB溶液（见附录的表 B. 10)
3,2,2. 4精密度和回收率检查标准溶液(PAR):用工烷配制的含然 DL-PCBs 溶液(见附录 B的表 B, H),用于方法建立时的初始精密度和网收率试验(IPR)及过程精密度和四收率试验(OFR)。3.2.25校止标准溶液：为含有天然（目标化合物）和同位素标记（定量内标、净化标准和回收率内标）的DLPCRs系列校正溶液（见附录B的表B.12)。其中 CS3用于已建立RRF的口常校和校正曲线校验(VER),CSI用于检查HRGC-IIRMS应具备的灵敏度。3. 2. 2,6 高灵敏度检查的标准溶液:为失然 DL PCBs 的溶液(浓度 0, 2 rg/ mL,见附录 B的表 B. 13)。3. 2. 2. 7校正检查的标准溶波浓度树当于 CS3,不含同位素标记，仪为天然 DL-PCBs 的溶液(50 ng/mL,见附录 B的丧 B. 14)3.3样品净化用吸附剂
样品静化用吸附剂应在制备后尽快使用，如果经过一段较长时间的保存，应检验其衍性在装有氧化铝和硅胶等容器上应标识其制备日期或开封日期。如巢标识不可辩认，应弃吸附剂，重新制备
由于存在PCBs污染问题，有时括合FCDD/Fs溯定的试剂不一-定适合DI.-PCBs 的测是，应该经过检查证实没有干扰后使用。
3.3.1氧化铝：如果内标化合物的回收率能达到要求，则可在酸性氧化铝或性氧化铝中选择独用于样品提取蔽痒化。但所有样品，包括初始精确度利回收率检查试验，均应便用同样类型的氛化铅。3.3.1.1酸性氛化铝：代130℃下至少加热活化12h。3.3.1.2碱性氧化铝：在600℃下至少加热活化24h，加热温度不能超过70C℃否则其吸附能力降低，活化后保存在130℃的密闭烧瓶中。成在烘烤后五大内使用。3.3.2硅胶：100自～200月或相当等级的硅胶。3.3.2.1活性硅胶：使用前，取硅胶用二氯甲烷清洗，在180下至少烘烤11或150℃下至少烘烤4h（最多6 lh)。在干爆器中冷却，保存在带螺嵋的玻璃瓶中。3.3.2.2酸化硅胶（44%、质最分数）：称取56g活性硅胶置于250ml.具塞磨口旋转烧瓶中，在玻璃棒2
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搅拌下加人 44 g 硫酸,将烧瓶用旋转蒸发器旋转［h～2 h,使之混和均匀无结块,置「燥器内可保存3周。
3.3.2.3碱化硅胶（33%，质量分数）：称取100g活性硅胶置于250ml.具塞磨旋转烧瓶中，在玻璃棒搅拌下逐滴加人 49 g NaOH溶液（l mol/L),将烧瓶用旋转燕发器rf旋转1h-~2h,使之混和均勾无结块。将碱化胶置干燥器内保存。3.3.2.4硝酸银硅胶：称取10硝酸银置于100ml.烧杯中，加水10mI.溶解。将该漆液转移至250 rml.旋转烧瓶,慢慢加人 90 活性硅胶.在旋转蒸发器中旋转1 h~-2 h,使之混和均匀,放置30min后将其置于预先加热至70℃干燥箱内，以10℃/h升温速率使干燥箱温度升高到120℃，并继续活化15 h。取出后，在1燥器中拎却，置于媽色皴璃瓶内保存。3.3.3弗罗里七（60月~100目）：使用前，称取500g，装入索氏提取器中、用适量正已烷：二氯甲烷(1：1.体积比）提取24h。
3.3.3.1含水1%(质量分数)的弗岁里士:称取弗罗单士99.0 g,加水1.0 mI.,搅拌均勺,用带氟Z烯螺帽的玻璃瓶封装。
3.3.4无水硫酸钠：优级纯。
3.3.5硫酸：优级纯。
3.3.6玻璃绵：使用前以二甲烷及正已烷回流18h，用氮气吹「后，置于棕色瓶内备用。3.3.7活性炭：
3.3.7.1CarbopakC.推荐使用Supelc1-0258，或其他相当的类型3.3.7.2Crlitr:545：推得使用Supelcn 2-0199，或其他相当的类型：3. 3.7,3 称取 9. 0 g Carbopak C 和 41. 0 g Celile: i45,充分混和,含活性炭为 [8%（质量分数)。在130℃中至少活化6h，在「爆器中保存。3.3.7.4凝胶色谱填料：Bio-Bcads$-x3,200日--400目。3.4参考基质
玉米油或具他植物油。基质中末检出PCDD/Fs利DLPCBs为最理想的情说。由子坏境PCBs的广泛存在,植物油中可能存在肯景水平的 PCBs:作为基质时要求其背景水平不得超过附录 C 的表C.1的检测限的值。
4仪器与设备
4.1高分辨气相色谱-高分辨质谱仪(HRGC-HRMS)。4.2色谱柱：
4. 2. 1 DB-5ms 柱(含 5%二苯基-95%. :甲基聚硅氧烷):用于 PCDD/Fs 检测。60 m× 0. 25 mm×0.25m或等效色谱柱；尺TX-2330(90双氧丙基-10%苯基鼠丙基聚硅氧烷）、60 m×U.25 mm×.！m或等效负谱柱。
4. 2,2 DB-5ms 柱:用了 D1-PCBs 检测。60 m×0.25 mmX0. 25 μm 或等效色谱杜。4.3组织勾浆器，
4.4绞肉机
4.5旋转蒸发器。
4.6氨气浓缩器。
4.7超声波清洗器。
4.8振药器。
4.9索氏提取器，
4. 10天-(感量万分之)。
4.11烘箱：用于烘烤和贮存吸附剂，能够在105℃~-250℃范围内保持恒温（上5℃）。3
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4.12玻璃层析柱：带聚四氟Zz烯柱塞，150mm×8mm,300mm×15mm,4.13会自动液体臀理系统（选用）：配备商业化的酸碱复合硅胶杜、氧化铝和活性炭净化杆。4.14凝胶色谱系统(GPC)(选用,于动或自动系统）：玻璃柱（内径15 mm-~20 rmm),内装 l g S3凝胶（200月-～400月）。
4.15高效液相色谱仪(HPI.C)(选)：包括泵、自动进样器、六通转换阀、检测器和增分收集器，配备Hypercarb(100 mmX4. fi tntm,5 μm)或相当色谱柱5 [试样制备与净化
样品采集与保存
5..1现场采集的样品用避光材料如铝箔，棕色玻璃瓶等包装，置小型冷冻箱中运输到实验案，一10℃以下低温保存。
5.1.2液体惑固体样品，如俏、肉，蛋、奶等可使用1燥惑无水蔬酸钠「燥，混，脂类样品可接用正已烷溶解后进行净化分离。5.2试样制备
5.2.1一当己知样品否量或估计其含量较高时，成适当减少用于分析的试样属。5.2.2
所有试样、空白试验和初始精密度-回收率试验（IPR）过程精密度-回收率试验（UR)应具有相同的分析过程，以便检查试样制备的污染来源及损失，5.2.3
溶剂和提取液的旋转蒸发浓缩
5.2.3.1莲接旋转蒸发器.将水浴锅预热至45，在试验开始前，预先将100mL正凹烷一二氯甲烷（1：1，体积比】作为提取落剂浓缩：以清洗整个旋转蒸发器系统，如有必要，检测经浓缩的剂和收集瓶中的溶剂,进行污染状况检查。在两个浓缩样品之间，分三次用2mL～3ml.溶剂洗涤旋转蒸发器接口，用烧杯收渠废液，
5.2.32将装有样品提取液的施型瓶连接到旋转蒸发器上，缓慢抽真空。5.2.33将射型瓶降至水浴锅中，调节转速和水浴的温度（或真空度）,使浓缩在15min～20min 内完成，什正确的浓缩速度下，流人废液收集瓶中的溶剂流量应保持稳定，溶剂不能有爆沸或可的沸腾现象发望
注：如果涨缩过快，可能会使样品损失。5.2.3.4当瓶型瓶中溶剂约为2 mI.时,将茄型瓶从水浴锅中移开,停止旋转。缓慢并小心地向旋转蒸发器中枚气，确保打开阀门时不要太快，以免样品冲出茄型瓶。用2 tmL溶剂洗涤接口。5.2.4索氏提取
5. 2. 4. 1
提取前，在索氏提取器中装人一支空纤维索或玻离纤维提取套筒，以正己：氯甲烷（」：1，体积比）)为提取溶剂，预提取8h后取出晾干5.2.4.2将下列处理好的样品装人提取套简（参见附录D的图I).1),高度以不超过溢流管为限。在提最套简中加人适量1C标记的定量内标（3.2.1.3)：用般璃棉盖件样品，平衡30min后装人素氏提取器，以适鼠正已烷：二氧甲烷（1：1，休积比）为济剂提取18h24h，回流速度控制在3次/h~4次/h.
a）鱼、肉蛋,奶等样品：称取 50~200 g样品（精确到(,00lg）,经过冷冻「燥F，准确称重,计算含水量。根据估计的污染水平,称取适量试样(精确到0.001g).加无水硫酸钠研磨，制成能自由流动的粉未，将粉末全部转移至处理好的提取套筒·置于索氏拙提器中进行提取。b）奶酪等固体乳制品样品：将奶酪自接研成细末后称量，其他体乳制品直接称量。称取适量试样（通常为10)g,精确到0.01g），置研体中，加无水硫酸钠，研磨成干煤的、可以自山流动的粉末。无水硫酸与海砂混合物使用量取决于试样的取样量及含水量。将粉未全部移至处理好的提取套筒。用沾有止已烷的棉签将研辞、表削血和研磨擦净，该棉签一同放入套4
简中进行提取，
5.2.4.3提取后，将提取液转移到筋型瓶中,旋转蒸发浓缩至近下。GB/T 5009.205—2007
5.2.4.4茄型瓶中的残留物用少量正已烷解以进行下面的净化。如需要考察净化过程的回收率则加入净化标准(3.2.1.2),但口常的分析中该步可省略5.2.4.5若分析结果以脂肪计，则需要测定样品的脂肪含量。测定脂肪含量后，可以加少量正已烷落解，逊行净化处理。
5.2.4.6脂肪含量的测定：
浓缩前准确称重施型瓶，将落剂浓缩至干后准确称重茄型瓶，两次称重结果的差值为试样的脂肪量。测定脂肪量后，加入少量正己烷溶解瓶中脂肪。按式(1)计算脂肪含鼠：
X, - ml×100
式中：
X.脂肪含量,%;
ml---试样的胎肪量,单位为克(g);m2—试样的质量，单位为克（g）。5.2.5液体奶样的提取
5.2.5.1依情况准确度取200mL~~30ml.样品，转移至大小合适的分波漏斗中，加人适量\Cl2标记的定量内标(3.2.1.3)。
5.2.5.2按20n1g/g样品的比例称取草酸钠，加少量水溶解后，将该溶液加人样品，充分振摇。5.2.5.3加人与样品等体积的乙醇，再进行振摇。5.2.5.4在样品-乙酶溶被中加人与5.2.5.3等体积的乙醚：正烧(2：3,体积比),振摇1 i。静置分层后，转移出有机相。然后在水相中加人与样品原始体积相同的已烷，振操1mm。静置分层后转截出有机相。合并有机相，浓缩至小子5nm5.2.5.5转移提取液至250mL分液漏斗中，加人30ml.蒸馏水振摇，弃去水相。5.2.5.6转移,E层有机相至250 ml.烧瓶中,加人适无水硫酸钠振摇。静置 30 min后,用一张经过甲苯淋洗过的滤纸过滤，滤液置于茄型瓶中。5.2.5.7按5. 2.4.6 步骤进行脂肪含量的测定5.2.5.8将提取液转移到茄型瓶中，旋转蒸发浓缩至近1。5.2.5.9茄型瓶中的残留物用少量正己烷溶解以进行下面的净化。如需要考察净化过程的回收率则加人净化标(3.2.1.2).但日常的分析中该步骤可省略。5.2.6黄油等油脂样品的提取
取适望试样置烧杯中,加热至50~60℃，使油脂明显地分离出来。融化的油脂经下爆的滤纸或者·--小毁玻璃棉过糖到另-容器中，从中雅确称取油脂样品（精确到0.01g）用正已烧解后，加人适量13C2标记的定量内标。
5.3试样净化
为了将PCDI)/Fs和DL PCBs从基质材料中充分地分离出来，可根据基质材料或于扰组分的具体情况选用不同的吸附剂进行净化。制备酸化硅胶或者分离柱以除去组织样品中的脂肪，凝胶渗透色谱可用来除去那些能降低气相色谱柱柱效的大相对分子质量下扰物（如蜂蜡等酸碱不能破环的大分子），必要时可作为手动尽析柱对提取液进行初步净化。酸性、中性和碱性硅胶，氧化铝和弗罗里上可用于消除非极性和极性的 T扰物质。活性炭柱能将 FCDD/Fs以及非邻位氯取代的 PCB77、PCB126 和PCB169与其他同类物质和1干扰物质分离，川在必要时使用。除了非邻位氯取代的PCB77、PCB126和PCB169外，其他 DL FCBs一般不需要活性炭柱净化，HPLC可以特异性地分离某些类似物和同系物。5
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通常在酸化硅胶或凝胶渗透色谱除去组织样品中的类脂后，使用3根色谱杜净化，即一根混合型硅胶柱称两根不同的氧化铝柱，PCT)D/Fs和TT-IPCI3s净化流程图鑫见附录I）的图ID.2。也可以采取其他备选净化方法，组合使用，无论采用何种红合，在进行静化前，实验案应证实其选择的净化过程能藏足方法的要求（参见第9章）
5.3.1酸化硅胶净化
5.3.1.1在浓缩的样品提取液中加人100mL正己烷，并加入50g酸化硅胶用旋转蒸发器在70℃下旋转浓缩20min。
5. 3.1.2静置8 trit~～10 rmin后,将止已烷到人型瓶中5. 事. 1. 3 用50 mL 正已烷洗瓶中硅胶,收集正已烧于 5. 3. 1. 2 的所型瓶中,重复 3 次。在 50 C和20kPa压力的条件下，用旋转蒸发器浓缩至2mL～5mL。如果酸化雄胶的颜色较深，则应重复上述过褪，占至酸化硅胶为浅寅色5.3.2混合硅胶柱净化
5.3.2.1色谱柱的填充：取内径为15mm的玻璃杜，底部填以玻璃棉后，依次装入2g活性硅胶、只碱性硅胶、2 &活性硅胶、10 g酸化硅胶、2 g活性硅胶,5 高硝酸银硅胶,2 g活性硅胶和2 g无水硫酸钠T法装杜，轻敲色谱杜·使传分布均与参见附录D的图。5.3.2.2
用150ml.正已烷预淋洗色谱柱。当液面降至无水蔬酸钠层上方约2mm时，关闭柱谢-弃去淋洗溉，柱下放一茄型瓶。检查色谱柱，如果出现沟流现象应重新装柱。5.3.23将已浓缩的提取液加入柱11，打开社阀使液而下降，当液面降至无水硫酸钠层时，关闭杜阀。
5.3.2.4用5mL的正己烷洗涤原瓶型瓶（5.3.1.3)两次，将洗涤液一并加人柱中，打开杜阅，使液面降至无水硫酸钠层。
5. 3. 2,5 如果仪测定 PCDD/Fs,则用 350 tL 正已烷洗脱;如果同时测定 PCDD/Fs 和 DL-PCBs,则用400m.正已烷洗脱，收集洗脱液。5.3.2]6在20kPa与50℃的条件下.将收集在肺型瓶中的洗脱液用旋转蒸发器浓缩至3mL~5mL供下十步净化用。
5.3.3氧化铝柱净化
本标滩中使用的两种氧化铝柱仪是吸附剂用量不同，氧化铝柱1为2息碱性氧化铝，氧化铝柱2为2.5g碱性氧化铝(参见附录D的图D.4)。5.3.3. 1
氧化铝托1
危谱柱填充：取内径为15mm的玻璃柱.底部填以玻璃棉后，依次装入2g无水硫酸钠、25g氧化铝、10无水硫酸钠。干法装社，轻敲色谐柱，使吸附剂分布均勾。b)
用 1i0 ml. 正已烷预淋洗色谱杜，当液面流至氧化铝上方约 2 mm 时,关闭柱阀。充去淋洗液，检查色谱柱，如果川现沟流现象应重新填柱，c）加人经过混合硅胶社净化的提取液，并用5mL正已烷分两次洗涤原粘型瓶（5.3.2.6)，将洗涤羧个并后上柱，重复洗漆一次，用G0nI.己烷消洗烧瓶后淋洗氧化铝柱·弃去淋洗液。仅测定PCDD/F≤时：用200mL正已烷=二氯甲烷(98：2,体积比)淋洗干扰组分，弃去淋洗e)
液,柱下放茄型瓶。用20) tmL正已烷二氯甲烷(1：」.体积比)洗脱，收集洗脱液，加人3 tnI.的半烷或壬烷，供 PCDD/Fs分析用。f）同时测定 PCDD/Fs 和 DL-PCBs 时：柱下放一-茄型瓶。用 90 mI.甲苯洗脱，收集洗脱液，加人3mL的辛烷或迁烷，供DI.PCBs分析用。柱下放置另一蔽型瓶，再用200ml.正已烷：二氯中烷(1 :1,体积比)洗脱,收集洗脱液，,加入 3 mL的辛烷或于烷,供PCID/Fs分析用。g）在20kPa与i0℃的条件下,将收集在麻型瓶中的各洗脱液分别用凝转蒸发器浓缩至3ml.6
5mL，供下一步净化用。
5.3.3.2氧化铝柱 2
GB/T 5009.205—2007
a）色谱柱填充：取内径为6mm～7mn的玻璃柱，底部填以玻璃棉后，依次装入2.，g氧化铝和2g无水硫酸钠。干法装柱，轻敲色谱柱，使吸附剂分布均勾。b）～f)步骤用于PCDI/Fs的净化：b）用20ul.止已烷预淋洗色谱柱，弃去淋洗液。检查色谱柱是否有沟流，如果山现沟流应重新填柱：
加人经氧化铅柱1净化的提取液(PCDD/Fs部分），让它完全渗人柱内。用4mL己烷：二氯甲烷（98：2，体积比）冲洗原茄型瓶（5.3.3.1)，将冲洗下来的溶液，倒入d)
柱内,让其完全人柱内;重复一次。用40 ml.的已烷：二氯甲烷（982.体积比)包括烧瓶清洗）淋洗，弃去淋洗液柱下放·站型瓶。
D用30㎡L正已烷：一氯甲烷（I：1,体积比）淋洗液洗脱PCDD/Fs，收集洗脱液，加人3InL的辛烷或毛烷。
g)-~j)步骤用于 DL-PCBs 的净化:g）用30 ml正已烷：二氯甲烷(99=1,体积比)预淋洗色谱柱,弃去淋洗液，柱下放-茄型瓶。检套色杜是香有沟流现蒙，如果出现淘流此重新装柱。h)
加人浓缩后的经氧化铅往1净化的提取液（DL-PCBs部分)，让其完全渗入仕内。i）用5mL己烧：二氯甲烷(1：1，体积比）洗涤原茹型瓶（5.3.3.1)两次。当样品已完全渗人柱内，将冲洗下米的溶液，倒人柱内，使其完全谬人柱内。i）用15mL正已烷：二氮甲烷（1：1.体积比）洗脱，收集洗脱液，加人3mL的辛烷或于烷，k）在20kPa与50℃的条件下，将收集在茄型瓶中的各洗脱液分别用旋转发器浓缩至3mL~5mL左右，供进--步测定或净化用5.3.4凝胶落透柱净化
用于去除样品中类脂的备选的净化方法，必要时选择，5,3.4. 1在色谱柱底部填上玻璃棉,装人 50 g Bio-I3eads S-X3凝胶,用甲苯冲洗后，保存在环烷 乙酸乙酯(1：1,体积比)中。
注：凝胶柱放置时，溶剂不得流空。5,3,4.2在样品提取液（通常浓缩至3 mL~5ml.)中加少景己烷，注入色谱柱，使样品提取液完全溶人柱内。
5.3.4.3用10ml.坏已烷，乙腋乙酯（11，体积比）分两次洗涤原肺型瓶，转人柱内：5.3.4.4用100mL环己烷：乙酸乙酯（1：1，体积比)淋洗，弃去淋洗液，柱下放一茄型瓶，5. 3. 4. 5用90 mI 环口烷： 乙酸乙酯(1 ：1，体积比>洗脱,得到的洗脱液中含PCDL/Fs 和LDLPCBs5.3.5活性炭柱净化
PCDD/Fs和非邻位氣取代的DI-PCBs备选的净化方法：必要时选择。5.3.5.1活性炭柱制备：取5ml--次性玻腐移液管，划除上端约3.8rm处并挫磨锐缘处，取适量玻璃棉置入并以两只 1 mL玻璃移液管于刻度\0\处塞紧,依次填入 0,5miL活性硅胶、0. 7 mL Carhot/Cclitcis45,0.5 ml. 活性硅胶,取适量玻璃棉置入并塞紧。使用前用下列溶剂依次淋洗:1 mL 甲苯,2 mL二氛甲烷：甲醇：甲苯(75：20 ：5,体积比)和 4 mL环凹烷：一氯甲烷(11，体积比)。5.3.5.2净化:先以2.5ml甲醇及2.5mL二氯甲烷正已烷(1 ：1,体积比)溶液依次将活性炭柱（切口端向1）淋洗两次，弃么淋洗液，倒置柱管（切口端向下），将浓缩到约1mL的提取液小心移入活性炭柱，然后用1mL二氯甲烷：正已烷（1：1，体积比)溶液洗涤原瓶两次，并移人活性炭柱内，待液面流至玻璃棉时,用吸球吹出柱内溶剂。再次倒置管柱（切口端向上）,用25mL甲苯洗脱柱了,用50 ml.GB/T 5009.205--2007
梨形瓶收集洗脱液。
5.3.5. 3收集的洗脱液加人 3ml. 的卒婉或于烷。在 20 kPa与 50C的条件下,将收集的洗脱液分别用旋转蒸发器浓缩至3mL-~5ml.s5.3.6弗罗里土柱净化
PCDD/Fs备选的净化方法.必要时选择，5.3.6.1色谱柱填充：取自径为15mm的玻璃柱，底部填上玻璃棉后，依次装人2g无水硫酸钠、1g弗罗里土、2无水硫酸钠。以正已烷避法装柱，轻敲色谱柱，使吸附剂分布均勾。5..6.2用200 ml,正已烷预淋洗已被活化的弗罗里十杆，当液面至距无水硫酸钠层药2mm时，关闭杆阀。5..6.3加人浓缩后的提取液，打开柱阀5..6.4用正已烷洗涤原型瓶两次，合并牟弗罗里土柱中。5.串.6.5用200 mL正已烷淋洗干扰组分，弃去淋洗液，柱下放一茄型瓶5.3.6.6用300mL二氯甲烷洗脱，收集洗脱液。5.3.6.7将3m1.辛婉或于焕加.人收集的洗脱液中，在20kPa与0的条件下，将收集的洗脱液用旋转蒸发器浓缩弃3mL~5mL
5. 3. 7 液体管理系统(FYIS)自动净化分离FMS白动净化分离原理与传统的科色谱方法相同，该系统使用一根一次性商业化净化柱，依次为多层硅胶柱、碱性氧化铝柱和活性炭忙。整个净化过程通过计算机按设定程序控制往复泵和阀门进行，5. 3.71由于FMS提供的净化杆存在容量问题,在处理高脂肪含量时需要预先使用酸化硅胶去除样品中的大部分脂肪。这可以通过在F号十增加个大容量酸化硅胶柱解次：也呼以合升采用任选步骤 5. 3. 1、5. 3. 2或5. 3. 1 或组合方法于动去除样品中的人部分脂肪,予以解决。5.3.7.2按仪器使用说明要求，连接净化色谱柱，5.3.73将各游化柱按顺连接在FMS系统上，按程序配好各洗脱溶液并连接好管路，改定计算机洗脱序(参见附录 D的图 LD,5)，5.3.74将经酸化硅胶或者凝胶渗透色谱处理的浓缩提取液转移到FMS净化系统的进样管。按照洗脱流程图顺序洗脱(参见附录 D 的图 L). 5),对样品进行净化、分离，分别收集5.3.75
PCDDs/Es和 DL-PCs 组分
5.3.7.6在20kPa与50℃的条件下，将收集的各洗脱液分别用旋转蒸发器浓缩至3ml.~5mL。5.4微量浓缩与溶剂交换
5.4.1据取物的溶剂交换
将浓缩的提取液转移到带聚四氟乙烯硅胶垫的棕色螺瓶中甲，置丁氮气浓缩器下吹氮浓缩5. 4. 1. 1
（可在15的控温条件下进行）。注：气流过大会引起样品损失，氮气流速调节到能够使溶剂表凸轻微振动，5.4.1.2如果需要称重，有必要将提取物用氮气吹至恒重。5.4.1.3如果属于提取液净化溶剂更换，按以下步骤操作：a）如果采用凝胶色谱系统(GPC)净化,需在凝胶色谱系统(GPC)进样前用二氧甲烷将提取液体积调至5.0mL。如果用HPLC净化，则需在HPLC进样前将提取液浓缩至1.0mL。如果用色谱柱（硅胶、活性炭或弗罗里土)进行净化，则需将提取物落剂转换成止已烷，并定容b)
牟1.0ml..
5.4.2净化后的微量浓缩与溶剂交换如果提取液浓缩后用于HRGC/HRMS分析，则将净化分离后得到的各流分分别用施转蒸发器浓缩至3mL-~5mL，再在氮气下浓缩至1ml~2mL，然后在氮气流F定量转移至装有0.2ml的锥形衬管的进样瓶中，并用正已烷洗涤浓缩蒸馏瓶，-并转入锥形村管中，待浓缩至约100μI，分别加人适量PCDDs/Fs和DL-PCIBs回收率内标溶液，正烧（可用辛婉代替）定容：继续在细小的氮气流下浓缩争溶8
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