2019-04-29
40.【生物—选修3:现代生物科技专题】(15分)
使用DNA重组技术,把天然或人工合成的遗传物质定向插入细菌、酵母菌或哺乳动物细胞中,使之充分表达,经纯化后而制得的疫苗称为基因工程疫苗。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒,该病毒表面A蛋白为主要抗原,其基因工程疫苗生产流程如图30。请回答:
(1)过程①表示 。
(2)可能利用 技术扩增获得A基因。使用该技术的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列来合成 。还需要有耐热的 酶。扩增时DNA解链的温度应控制在 ℃。而互补链延伸时的温度应控制在 ℃。
(3)过程③构建A基因重组载体时,除了A基因外,还必须有 、 和 基因等。这一过程需要使用 和 这两种工具酶。
(4)过程④中选用大肠杆菌作为受体细胞,最常见的转化方法是:用 处理,得到 细胞,再将经过处理的细胞与溶有A基因重组表达载体的缓冲溶液混合,并控制在一定的温度使之完成转化。
(5)可用 技术检测受体细胞菌的DNA上是否插入了A基因,要检测A基因是否成功表达还需检测受体细菌 。
(1)过程①是以RNA为模板合成DNA是逆转录。
(2)大量获得基因的技术是PCR技术,PCR扩增DNA需要引物,还需要DNA聚合酶。扩增时没有解旋酶,用DNA热变性代替解旋,所以解旋的温度控制在90~95摄氏度,延伸时碱基要互补配对,温度要低,是70~75摄氏度。
(3)过程③构建A基因重组载体时,除了A基因外,还必须有启动子、终止子和标记基因等。这一过程需要进行切割和连接DNA,需要使用限制性核酸内切酶和DNA连接酶这两种工具酶。
(4)过程④中选用大肠杆菌作为受体细胞,最常见的转化方法是:用钙离子处理,得到感受态细胞,再将经过处理的细胞与溶有A基因重组表达载体的缓冲溶液混合,并控制在一定的温度使之完成转化。
(5)检测时可以用DNA杂交技术看看是否互补配对。还需要检测目的基因是否表达,检测是否合成A蛋白。
(1)过程①是以RNA为模板合成DNA是逆转录。
(2)大量获得基因的技术是PCR技术,PCR扩增DNA需要引物,还需要DNA聚合酶。扩增时没有解旋酶,用DNA热变性代替解旋,所以解旋的温度控制在90~95摄氏度,延伸时碱基要互补配对,温度要低,是70~75摄氏度。
(3)过程③构建A基因重组载体时,除了A基因外,还必须有启动子、终止子和标记基因等。这一过程需要进行切割和连接DNA,需要使用限制性核酸内切酶和DNA连接酶这两种工具酶。
(4)过程④中选用大肠杆菌作为受体细胞,最常见的转化方法是:用钙离子处理,得到感受态细胞,再将经过处理的细胞与溶有A基因重组表达载体的缓冲溶液混合,并控制在一定的温度使之完成转化。
(5)检测时可以用DNA杂交技术看看是否互补配对。还需要检测目的基因是否表达,检测是否合成A蛋白。