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可溶性还原糖的鉴定原理
生物组织中普遍存在的可溶性糖种类较多,常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖.前三种糖的分子内都含有游离的具有还原性的半缩醛羟基,因此叫做还原性糖;蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基,因此叫做非还原性糖,不具有还原性.实际上本实验中,用斐林试剂只能检验生物组织中可溶性的还原糖的存在与否,而不能鉴定可溶性的非还原性糖.
斐林试剂由质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀.Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下,能够生成砖红色的Cu2O沉淀,而葡萄糖本身被氧化成葡萄糖酸.
用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色—棕色—砖红色(沉淀).
蛋白质的鉴定原理
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂.双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.01 g/mL的硫酸铜溶液.在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)能与铜离子作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应.由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此,蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应.
用于鉴定可溶性还原糖的实验材料准备
植物组织是常用的实验材料,但必须加以选择.在双子叶植物中,光合作用的主要产物葡萄糖形成后合成为淀粉,暂时储藏在叶子内,因此最好不用双子叶植物的叶子作实验材料,有些单子叶植物,如韭菜、鸢尾,并不将光合作用的初始产物转变为淀粉,因此叶内含有大量的可溶性单糖,但是,由于叶片中叶绿素的颜色较深,对于鉴定时的颜色反应起着掩盖作用,导致实验现象不明显,因此,也不宜用单子叶植物的叶子作实验材料.
本实验最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织(或器官),而且组织的颜色较浅,或近于白色的,如苹果和梨的果实.经试验比较,颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜.
用于鉴定脂肪的实验材料准备
实验材料最好选择富含脂肪的种子,如花生种子(取其子叶).供实验用的花生种子,必须提前浸泡3~4 h.浸泡时间短了,不容易切成片;浸泡时间过长,则组织太软,切下的薄片不易成形.
做鉴定脂肪的实验,教师可根据本地区的情况选用苏丹III或苏丹IV染液.苏丹III染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色,苏丹IV染液遇脂肪的颜色反应为红色.因苏丹IV染液与脂肪的亲和力比较强,所以,染色的时间应比较短,一般为1 min左右.
用于鉴定蛋白质的实验材料准备
实验材料最好选用富含蛋白质的生物组织(或器官),植物材料常用的是大豆,动物材料常用的是鸡蛋(卵白).如用大豆,必须提前浸泡1~2 h,这样容易研磨成浆.有条件的学校,可以直接采用现成的大豆磨成的豆浆,豆浆可以购买,也可用小型的榨汁机制取.利用豆浆作实验材料,可以节约实验时间.
如果用稀释的卵白作实验材料,效果会更好.
可溶性还原糖的鉴定原理
生物组织中普遍存在的可溶性糖种类较多,常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖.前三种糖的分子内都含有游离的具有还原性的半缩醛羟基,因此叫做还原性糖;蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基,因此叫做非还原性糖,不具有还原性.实际上本实验中,用斐林试剂只能检验生物组织中可溶性的还原糖的存在与否,而不能鉴定可溶性的非还原性糖.
斐林试剂由质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀.Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下,能够生成砖红色的Cu2O沉淀,而葡萄糖本身被氧化成葡萄糖酸.
用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色—棕色—砖红色(沉淀).
蛋白质的鉴定原理
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂.双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.01 g/mL的硫酸铜溶液.在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)能与铜离子作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应.由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此,蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应.
用于鉴定可溶性还原糖的实验材料准备
植物组织是常用的实验材料,但必须加以选择.在双子叶植物中,光合作用的主要产物葡萄糖形成后合成为淀粉,暂时储藏在叶子内,因此最好不用双子叶植物的叶子作实验材料,有些单子叶植物,如韭菜、鸢尾,并不将光合作用的初始产物转变为淀粉,因此叶内含有大量的可溶性单糖,但是,由于叶片中叶绿素的颜色较深,对于鉴定时的颜色反应起着掩盖作用,导致实验现象不明显,因此,也不宜用单子叶植物的叶子作实验材料.
本实验最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织(或器官),而且组织的颜色较浅,或近于白色的,如苹果和梨的果实.经试验比较,颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜.
用于鉴定脂肪的实验材料准备
实验材料最好选择富含脂肪的种子,如花生种子(取其子叶).供实验用的花生种子,必须提前浸泡3~4 h.浸泡时间短了,不容易切成片;浸泡时间过长,则组织太软,切下的薄片不易成形.
做鉴定脂肪的实验,教师可根据本地区的情况选用苏丹III或苏丹IV染液.苏丹III染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色,苏丹IV染液遇脂肪的颜色反应为红色.因苏丹IV染液与脂肪的亲和力比较强,所以,染色的时间应比较短,一般为1 min左右.
用于鉴定蛋白质的实验材料准备
实验材料最好选用富含蛋白质的生物组织(或器官),植物材料常用的是大豆,动物材料常用的是鸡蛋(卵白).如用大豆,必须提前浸泡1~2 h,这样容易研磨成浆.有条件的学校,可以直接采用现成的大豆磨成的豆浆,豆浆可以购买,也可用小型的榨汁机制取.利用豆浆作实验材料,可以节约实验时间.
如果用稀释的卵白作实验材料,效果会更好.