优质解答
A、琼脂熔化时，容易糊底，所以熔化琼脂时，需要用玻璃棒不断搅拌以防止糊底，A正确；
B、培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，不是干热灭菌，B错误；
C、倒平板操作时，待平板凝固后，需要将其倒过来放置，防止水珠落到培养基上，C正确；
D、用平板划线法分离大肠杆菌时，第一次划线前和每次划线后，都要对接种环进行灼烧灭菌，D正确．
故选：B．
A、琼脂熔化时，容易糊底，所以熔化琼脂时，需要用玻璃棒不断搅拌以防止糊底，A正确；
B、培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，不是干热灭菌，B错误；
C、倒平板操作时，待平板凝固后，需要将其倒过来放置，防止水珠落到培养基上，C正确；
D、用平板划线法分离大肠杆菌时，第一次划线前和每次划线后，都要对接种环进行灼烧灭菌，D正确．
故选：B．