优质解答
①100℃煮沸5～6min可以杀死微生物细胞和一部分芽孢，①正确；
②酒精灯火焰附近存在一个无菌区，为了无菌操作，接种操作要在酒精灯火焰附近进行，②正确；
③无菌繁殖脱毒苗，植物的外植体要进行消毒，③正确；
④利用葡萄制作葡萄酒利用的是附着于葡萄皮表面的野生型酵母菌，所以制作葡萄酒时葡萄不进行灭菌，以免杀死酵母菌，④错误；
⑤培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，⑤正确；
⑥指示剂和染料混有微生物，故加入培养基前需灭菌，⑥错误．
所以，④⑥错误．
故选：D．
①100℃煮沸5～6min可以杀死微生物细胞和一部分芽孢，①正确；
②酒精灯火焰附近存在一个无菌区，为了无菌操作，接种操作要在酒精灯火焰附近进行，②正确；
③无菌繁殖脱毒苗，植物的外植体要进行消毒，③正确；
④利用葡萄制作葡萄酒利用的是附着于葡萄皮表面的野生型酵母菌，所以制作葡萄酒时葡萄不进行灭菌，以免杀死酵母菌，④错误；
⑤培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，⑤正确；
⑥指示剂和染料混有微生物，故加入培养基前需灭菌，⑥错误．
所以，④⑥错误．
故选：D．