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(2012•福建)[生物一现代生物科技专题]必答题肺细胞中的let7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌.研究人员利用基因工程技术将let-7基因导人肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制.该基因工程技术基本流程如图1.请回答:(1)进行过程①时,需用酶切开载体以插入let-7基因.载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位,以驱动let-7基因转录,该部位称为.(2)进行过程e委时,需用酶处理贴附在培养皿壁上的细胞,以利于传代培养.(3)研究发现,如let-7基因能影响癌基因RAS的表达,其影

2019-04-29

(2012•福建)[生物一现代生物科技专题]必答题
肺细胞中的let7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌.研究人员利用基因工程技术将let-7基因导人肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制.该基因工程技术基本流程如图1.

请回答:
(1)进行过程①时,需用______酶切开载体以插入let-7基因.载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位,以驱动let-7基因转录,该部位称为______.
(2)进行过程e委时,需用______酶处理贴附在培养皿壁上的细胞,以利于传代培养.
(3)研究发现,如let-7基因能影响癌基因RAS的表达,其影响机理如图2.据图分析,可从细胞中提取.
______进行分子杂交,以直接检测let-7基因是否转录.肺癌细胞增殖受到抑制,可能是由于细胞中______(RASmRNA/RAS蛋白质)含最减少引起的.
优质解答
(1)过程①表示基因表达载体的构建,在该过程中需要用限制性核酸内切酶(简称限制酶)对载体进行切割,以便于目的基因的插入;启动子是一段特殊的DNA序列,是RNA聚合酶识别和结合的位点,RNA聚合酶结合到该位点,可驱动转录过程.
(2)过程②表示动物细胞培养,培养过程中出现接触抑制现象后,可以用胰蛋白酶处理,使之分散成单个细胞,随后分装到新的培养瓶中进行传代培养.
(3)判断目的基因是否在受体细胞中转录,可用分子杂交技术来检测,从细胞中提取mRNA和用放射性同位素或者荧光标记的目的基因单链DNA片段进行杂交.根据题中信息“肺细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌”知,导入let-7基因后,肺癌细胞的增殖受到抑制;据图2可知,let-7基因影响RAS基因表达的机理是:let-7基因转录产物miRNA与RAS基因转录产物RAS mRNA结合,使RAS基因翻译受到抑制,引起细胞中的RAS蛋白含量减少,进而导致癌细胞增殖受到抑制.
故答案为:
(1)限制性核酸内切酶(或限制)   启动子
(2)胰蛋白
(3)RNA   RAS蛋白
(1)过程①表示基因表达载体的构建,在该过程中需要用限制性核酸内切酶(简称限制酶)对载体进行切割,以便于目的基因的插入;启动子是一段特殊的DNA序列,是RNA聚合酶识别和结合的位点,RNA聚合酶结合到该位点,可驱动转录过程.
(2)过程②表示动物细胞培养,培养过程中出现接触抑制现象后,可以用胰蛋白酶处理,使之分散成单个细胞,随后分装到新的培养瓶中进行传代培养.
(3)判断目的基因是否在受体细胞中转录,可用分子杂交技术来检测,从细胞中提取mRNA和用放射性同位素或者荧光标记的目的基因单链DNA片段进行杂交.根据题中信息“肺细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌”知,导入let-7基因后,肺癌细胞的增殖受到抑制;据图2可知,let-7基因影响RAS基因表达的机理是:let-7基因转录产物miRNA与RAS基因转录产物RAS mRNA结合,使RAS基因翻译受到抑制,引起细胞中的RAS蛋白含量减少,进而导致癌细胞增殖受到抑制.
故答案为:
(1)限制性核酸内切酶(或限制)   启动子
(2)胰蛋白
(3)RNA   RAS蛋白
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