一、实验目的和内容
目的：学会检测微生物与氧关系的方法,了解微生物与氧的关系.
内容：通过调整转速和瓶装量检测微生物生长与氧气的关系.
二、实验材料和用具
大肠杆菌斜面菌种、牛肉膏蛋白胨培养基.
吸量管、三角瓶、恒温振荡器、721分光光度计、比色杯等.
三、操作步骤
(一)LB培养基的制备
1．配制牛肉膏蛋白胨培养基.
2．分装 取4个300mL三角瓶,每瓶装入50 mL培养基,编号为1、2、3、4；另取4个500mL三角瓶,每瓶分别装入50mL、l00mL、150mL和200mL培养基,编号为5、6、7、8.再取一个100mL三角瓶,装入20mL培养基,剩余的培养基装入到两个500mL三角瓶中,所有三角瓶均用8层纱布和线绳包扎.
3．灭菌 将上述分装的培养基于121C湿热灭菌30min,冷却后备用.
(二)供试菌种的制备
l．菌种活化 将冰箱中储藏的大肠杆菌斜面菌种转接至牛肉膏蛋白胨斜面培养基上,37℃培养18~20h备用.
2．种子制备 取上述活化的大肠杆菌一环接人盛有20mL牛肉膏蛋白胨培养基的100mL三角瓶中,37℃,200r/min摇床培养16～18h作为供试种子.
(三)不同转速对大肠杆菌生长的影响
取1~4号三角瓶,每瓶接入lmL上述大肠杆菌种子,1号静置于温箱中,2号置75r/min摇床,3号置于150r/min摇床,4号置于225r/min摇床,在37℃下培养12~16h后取出,摇匀,经适当稀释后,测定每个瓶中的OD值(λ=600nm),并同时以原培养基不接种作对照测定.记录结果于表17-1中.
(四)不同瓶装量对大肠杆菌生长的影响
取上述5~8号三角瓶,按1%的接种量接人上述大肠杆菌种子,37C,200r/min培养12~16h后一并取出,用721分光光度计测定OD值(λ=600m),如密度太大可作适当稀释后再测OD值,记录实验结果于表17-2中.
四、注意事项
1．接种前要将种子充分摇匀,接种时要保证接种量一致.严格无菌操作,以免污染.
2．测定OD值时要摇匀后再取培养液.若经稀释后测定,则各瓶培养物的稀释倍数要一致.
五、实验报告
1．将测定结果列于表17-1和表17-2中：
表17-1 不同转数对大肠杆菌生长量的影响
表17-2 不同瓶装量对大肠杆菌生长量的影响
2．绘制曲线分别以转速或瓶装量为横坐标,以OD值为纵坐标绘制大肠杆菌生长与氧关系的曲线.
3．试对以上曲线进行分析. 一、实验目的和内容
目的：学会检测微生物与氧关系的方法,了解微生物与氧的关系.
内容：通过调整转速和瓶装量检测微生物生长与氧气的关系.
二、实验材料和用具
大肠杆菌斜面菌种、牛肉膏蛋白胨培养基.
吸量管、三角瓶、恒温振荡器、721分光光度计、比色杯等.
三、操作步骤
(一)LB培养基的制备
1．配制牛肉膏蛋白胨培养基.
2．分装 取4个300mL三角瓶,每瓶装入50 mL培养基,编号为1、2、3、4；另取4个500mL三角瓶,每瓶分别装入50mL、l00mL、150mL和200mL培养基,编号为5、6、7、8.再取一个100mL三角瓶,装入20mL培养基,剩余的培养基装入到两个500mL三角瓶中,所有三角瓶均用8层纱布和线绳包扎.
3．灭菌 将上述分装的培养基于121C湿热灭菌30min,冷却后备用.
(二)供试菌种的制备
l．菌种活化 将冰箱中储藏的大肠杆菌斜面菌种转接至牛肉膏蛋白胨斜面培养基上,37℃培养18~20h备用.
2．种子制备 取上述活化的大肠杆菌一环接人盛有20mL牛肉膏蛋白胨培养基的100mL三角瓶中,37℃,200r/min摇床培养16～18h作为供试种子.
(三)不同转速对大肠杆菌生长的影响
取1~4号三角瓶,每瓶接入lmL上述大肠杆菌种子,1号静置于温箱中,2号置75r/min摇床,3号置于150r/min摇床,4号置于225r/min摇床,在37℃下培养12~16h后取出,摇匀,经适当稀释后,测定每个瓶中的OD值(λ=600nm),并同时以原培养基不接种作对照测定.记录结果于表17-1中.
(四)不同瓶装量对大肠杆菌生长的影响
取上述5~8号三角瓶,按1%的接种量接人上述大肠杆菌种子,37C,200r/min培养12~16h后一并取出,用721分光光度计测定OD值(λ=600m),如密度太大可作适当稀释后再测OD值,记录实验结果于表17-2中.
四、注意事项
1．接种前要将种子充分摇匀,接种时要保证接种量一致.严格无菌操作,以免污染.
2．测定OD值时要摇匀后再取培养液.若经稀释后测定,则各瓶培养物的稀释倍数要一致.
五、实验报告
1．将测定结果列于表17-1和表17-2中：
表17-1 不同转数对大肠杆菌生长量的影响
表17-2 不同瓶装量对大肠杆菌生长量的影响
2．绘制曲线分别以转速或瓶装量为横坐标,以OD值为纵坐标绘制大肠杆菌生长与氧关系的曲线.
3．试对以上曲线进行分析.